環(huán)境內(nèi)分泌干擾物雙酚A對大鼠海馬LTP的影響.pdf

1、雙酚A(biphenol A，BPA)，是一種具有雙重作用的激素類物質(zhì)，它的雙重作用是指能夠產(chǎn)生擬雌激素和抗雌激素的效應。BPA作為一種非常典型環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，能夠在記憶形成過程中對突觸的可塑性和信息的儲存起到至關重要的作用。雌激素能夠參與大腦內(nèi)部突觸可塑性的維護并且可以直接的促進神經(jīng)細胞突觸的形成以及軸突和樹突的產(chǎn)生、生長。因為雌激素可與膜上的受體作用后通過誘導的各種信號分子的快速激活并產(chǎn)生相對應的神經(jīng)保護和神經(jīng)營養(yǎng)作用。雌二醇可以

2、影響細胞內(nèi)多種信號途徑的轉導，并以此基礎上來調(diào)節(jié)學習記憶的相關功能。BPA能夠影響突觸的結構，也可以影響突觸功能的可塑性，但具體的作用機制并不清楚。本實驗首先研究了不同濃度的BPA對長時程增強(Long-term potentiation，LTP)的影響，接下來應用雌激素受體阻斷劑(ICI182，780)或MEK1/2阻斷劑(U0126)預處理，用以探究雌激素受體和ERK(Extracellularsignal-regulated ki

3、nases)信號通路是否參與了BPA對LTP作用的這一過程，并進行深入的分析BPA作用于LTP的分子機制。
　　方法:本實驗利用電生理技術來記錄離體橫切大鼠腦片的海馬齒狀回區(qū)域的場興奮性突觸后電位（field Excitatory Postsnaptic potential，fEPSP）和LTP。選取清潔級的5～6周齡的雄性Wistar大鼠，將其快速斷頭，利用切片機制備成厚度為350μm的腦片，放置于持續(xù)通入95％氧氣和5％二氧化

4、碳混合氣的人工腦脊液(Artificial Cerebrospinal fluid，ACSF)的孵育室中，室溫下提前孵育1小時后待使用時再進行轉移。記錄時將腦片轉移到記錄槽中，利用微操縱儀將同心圓電極和玻璃記錄電極放置在海馬齒狀回區(qū)域，分別將腦片急性暴露于1、10、100、1000 nM BPA并持續(xù)以ACSF灌流，在藥物孵育30 min后在基礎刺激為0.033 Hz的條件下開始記錄腦片fEPSP，30 min后給予腦片參數(shù)為2串100

5、 Hz的高頻刺激，繼續(xù)給予與高頻前相同條件的基礎刺激并利用pClamp10.3軟件測量fEPSP的峰值，并計算在HFS后0～60 min中的EPSP的幅值與在基礎刺激下30 min的EPSP幅度平均值比值，作為LTP的幅值。實驗結果中的數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準誤(means±S.E.M.)來表示，并進行單因素方差分析(One-way ANOVA)和雙尾t檢驗(two-tailed t test)。
　　結果:1.不同濃度的BPA急性處理

6、海馬腦片（預孵育30 min后開始記錄并持續(xù)給藥），發(fā)現(xiàn)BPA(1～1000 nM)對高頻刺激后的峰值均有抑制作用;但100 nMBPA顯著增強LTP的維持(191.30±10.46％，比對照組升高34.80％，p＜0.01)，而1000 nM BPA對LTP維持表現(xiàn)出抑制效應(121.45±4.01％，比對照組降低15.50％，p＜0.05)。
　　2.100 nM BPA對LTP的增強作用可以被雌激素受體阻斷劑ICI182，7

7、80抑制(126.75±7.12％，比BPA組降低33.89％，p＜0.001);MEK1/2阻斷劑U0126預處理不能誘導LTP，但先用BPA預孵育30 min再加入U0126共同作用，BPA誘導的LTP增強作用被部分抑制(152.19±3.8％，比BPA組降低20.62％，p＜0.01)。
　　3.當100 nM BPA與10 nM17β-E2共同處理時，BPA可以完全抑制E2對基礎EPSP的增強作用(122.25±4.59％