用于檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌mecA基因片段的超靈敏電化學(xué)生物傳感器研究.pdf

1、目的:
　　本文將電化學(xué)生物傳感器方法的高特異性和納米金雙標記的信號放大作用結(jié)合在一起，構(gòu)建一種超靈敏檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌上mecA基因片段的電化學(xué)生物傳感器，有望用于臨床實際標本的早期快速檢測。
　　方法:
　　制備核酸和酶雙標記納米復(fù)合物，并分步探討核酸、核酸和酶雙標記的納米金復(fù)合物等不同修飾步驟的電極的電化學(xué)行為。研究超靈敏檢測金黃色葡萄球菌上mecA片段的電化學(xué)生物傳感器方法，并對其檢測條件進行優(yōu)化，然

2、后對該生物傳感器進行方法學(xué)評價。首先在恒電勢下，將裸玻碳電極浸入在氯金酸溶液中，電沉積納米金顆粒。然后固定捕獲探針，MCH封閉電極表面的非特異結(jié)合位點，加入目標探針與捕獲探針形成“A=T”，“C=G”互補配對，最后加入雙標記的檢測探針，形成“三明治”夾心結(jié)構(gòu)，在酶的催化作用下，產(chǎn)生電流信號。與其他同類方法相比，該方法明顯減弱分別加入檢測探針和酶繁瑣的程度，大大縮減了反應(yīng)時間，避免了實驗中的相對誤差，提高了整個實驗的靈敏度。利用優(yōu)化實驗中

3、探索出的最佳反應(yīng)時間和酶的濃度，用差分脈沖伏安法對待測物所引起的電流信號變化進行檢測，電極的不同修飾步驟用掃描電子顯微鏡(SEM)進行表征，電極的阻抗變化用電阻抗譜(EIS)進行表征。
　　結(jié)果:
　　基于以上檢測探針與酶同時標記納米金的雙標記結(jié)構(gòu)，目標探針分別與捕獲探針，檢測探針形成“三明治”夾心結(jié)構(gòu)，所構(gòu)成的DNA生物傳感器，在最優(yōu)化實驗條件下，檢測信號與目標DNA的濃度在50-250 pM內(nèi)形成良好的線性關(guān)系，最低檢測