植酸酶基因phyA轉(zhuǎn)化大豆及轉(zhuǎn)基因新材料創(chuàng)制.pdf

1、土壤磷多以有機(jī)態(tài)形式存在,其中植酸磷占50％以上,分解利用植酸態(tài)磷是提高土壤磷利用效率、改善植物磷營(yíng)養(yǎng)的重要途徑。植酸酶可有效水解土壤中的植酸態(tài)磷,釋放出無(wú)機(jī)磷酸及其鹽類,提高植物對(duì)土壤中有機(jī)磷的利用率。本研究以無(wú)花果曲霉中的植酸酶phyA為轉(zhuǎn)化基因,通過(guò)構(gòu)建表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化不同大豆品種,獲得了轉(zhuǎn)基因新材料。具體研究結(jié)果如下:
　　 1.采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)技術(shù)將phyA基因分別轉(zhuǎn)化大豆品種冀豆12和冀豆16,獲得了轉(zhuǎn)基因新材料。其中,

2、冀豆12T0代陽(yáng)性植株30株、T1代58株(8個(gè)株系)、T2代23株(3個(gè)株系)、T3代2株(1個(gè)株系),并已收獲T4代種子;冀豆16T0代陽(yáng)性植株1株、T1代5株、T2代1株,并已收獲T3代種子。
　　 2.采用花粉管通道轉(zhuǎn)化技術(shù)將phyA線性片段轉(zhuǎn)化大豆品種冀豆12和五星1號(hào),獲得了陽(yáng)性材料。其中,冀豆12T0代植株58株、T1代28株(9個(gè)株系)、T2代19株(5個(gè)株系)、T3代17株(4個(gè)株系)、T4代5株(1個(gè)株系);

3、五星1號(hào)T0代14株、T1代1株,并已收獲T2代種子。同時(shí),采用該技術(shù)將載體phyA轉(zhuǎn)入冀豆12和五星1號(hào),分別獲得冀豆12T0代植株65株,五星1號(hào)T0代5株,并已收獲T1代種子。
　　 3.構(gòu)建phyA的無(wú)標(biāo)記(Marker-free)表達(dá)載體pX6-phyA,經(jīng)農(nóng)桿菌介導(dǎo)子葉節(jié)技術(shù)轉(zhuǎn)化大豆品種鄭92116,獲得T0代陽(yáng)性植株2株;經(jīng)花粉管通道技術(shù)轉(zhuǎn)入五星2號(hào),獲得T0代陽(yáng)性植株3株。
　　 4.分析了轉(zhuǎn)phyA大豆

4、新材料在植酸磷條件下根系分泌植酸酶活性。3個(gè)轉(zhuǎn)基因株系在植酸磷處理下根系分泌植酸酶活性分別比野生型大豆提高5%、13%和24%。其中,2號(hào)和3號(hào)株系與野生型大豆差異分別達(dá)到0.05和0.01顯著水平。
　　 5.通過(guò)分析轉(zhuǎn)phyA大豆新材料根際周?chē)寥牢⑸锖堪l(fā)現(xiàn),在幼苗期、開(kāi)花期和結(jié)莢期,轉(zhuǎn)phyA大豆新材料的根際周?chē)寥牢⑸?真菌、細(xì)菌和放線菌)含量與野生型對(duì)照沒(méi)有明顯差異,說(shuō)明phyA的轉(zhuǎn)入并未影響大豆植株根際周?chē)耐?/p>