福建戴云山金線蓮工廠化育苗關(guān)鍵技術(shù)研究.pdf

1、金線蓮[Anoectochilus roxburghii( Wall.) Lindl.]具有很高的藥用價(jià)值以及觀賞價(jià)值，但是隨著人工開采和自然條件的惡化，其野生資源瀕于枯竭。本試驗(yàn)以福建戴云山金線蓮為材料，進(jìn)行工廠化育苗的優(yōu)化研究以及ISSR遺傳穩(wěn)定性檢測。主要進(jìn)行的工作包括：外植體無菌株系的建立，芽苗、原球莖、根狀莖固液培養(yǎng)基的增殖研究；原球莖、根狀莖分化芽苗以及生根壯苗移栽的試驗(yàn)研究；對不同繼代次數(shù)的金線蓮組培苗樣品進(jìn)行了ISSR遺

2、傳穩(wěn)定性的分析。最后，通過試驗(yàn)中得到的技術(shù)參數(shù)建立金線蓮工廠化育苗模式，并進(jìn)行福建戴云山金線蓮工廠化育苗的經(jīng)濟(jì)效益分析。主要研究結(jié)果如下：
　　1、福建戴云山金線蓮工廠化育苗的主要技術(shù)研究
　　本試驗(yàn)以福建戴云山金線蓮為材料，進(jìn)行了外植體無菌株系建立，不同培養(yǎng)基對芽苗、原球莖、根狀莖的增殖影響，液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基的比較試驗(yàn)，不同處理對原球莖、根狀莖分化芽苗的影響以及不同培養(yǎng)基對生根和壯苗的影響研究。
　　①福建戴云

3、山金線蓮以莖段為外植體的無菌株系的建立。發(fā)現(xiàn)升汞消毒10 min的效果最佳，其污染率最低，存活率最高。污染率和存活率分別為12.22%、82.22%。
　?、诟＝ù髟粕浇鹁€蓮芽苗、原球莖、根狀莖增殖培養(yǎng)體系的優(yōu)化，分別以金線蓮的芽苗、原球莖以及根狀莖為材料，比較不同鹽以及6-BA和NAA的濃度對其增殖的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，金線蓮芽苗增殖的最優(yōu)培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.3 mg/L；原球莖增殖效果最好的

4、培養(yǎng)基為 MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.3 mg/L；根狀莖增殖的最優(yōu)培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.3 mg/L。
　　在優(yōu)化培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上進(jìn)行了液體培養(yǎng)基與固體培養(yǎng)基的比較，試驗(yàn)結(jié)果表明，液體培養(yǎng)基對金線蓮增殖的影響明顯優(yōu)于固體培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中，芽苗增殖系數(shù)是固體培養(yǎng)基中的2.86倍，原球莖增殖系數(shù)是固體培養(yǎng)基的1.70倍，根狀莖的增殖系數(shù)是固體培養(yǎng)基的1.20倍。
　?、鄹＝ù髟粕浇?/p>

5、線蓮原球莖、根狀莖分化芽苗的優(yōu)化研究。分別以金線蓮的原球莖和根狀莖為材料，比較不同鹽以及6-BA、NAA濃度對其分化芽苗的影響，利用賦值評分的方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明原球莖分化芽苗最優(yōu)培養(yǎng)基為 MS+6-BA1.5 mg/L+NAA0.1 mg/L，總分為8.17，根狀莖分化芽苗最優(yōu)培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA1.5 mg/L+NAA0.01 mg/L，總分為9.31。
　?、芨＝ù髟粕浇鹁€蓮的生根研究。以金線蓮的芽苗為材料，比

6、較不同濃度的AC、IBA和NAA對金線蓮生根的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明1/2MS+IBA1.0 mg/L+NAA0.3 mg/L為金線蓮生根最優(yōu)培養(yǎng)基。
　?、莶煌菨舛纫约疤砑游飳Ω＝ù髟粕浇鹁€蓮壯苗的影響。以金線蓮的芽苗為材料，在生根優(yōu)化培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上進(jìn)一步比較不同糖濃度、不同香蕉與馬鈴薯濃度的組合對金線蓮壯苗的影響。以賦值評分的方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)結(jié)果表明：1/2MS+瓊脂0.6%+NAA0.3 mg/L+IBA1.0 mg/L

7、+白糖2%+馬鈴薯10%+香蕉10%為金線蓮壯苗最優(yōu)培養(yǎng)基。并且通過觀察和分析發(fā)現(xiàn)，香蕉相對于馬鈴薯更有利于金線蓮的增重。
　　2、福建戴云山金線蓮組培苗移栽試驗(yàn)研究
　　待到芽苗高3-4 cm，具有2-3條以上不定根時(shí)，便可進(jìn)行移栽，選擇長勢一致的金線蓮組培苗作為移栽材料。進(jìn)行不同基質(zhì)，不同肥料濃度以及不同季節(jié)的比較試驗(yàn)。
　?、俨煌|(zhì)的比較試驗(yàn)表明，泥炭土：椰糠：樹皮：沙=3:3:1:2為最優(yōu)的移栽基質(zhì)。

8、　?、谝宰顑?yōu)基質(zhì)為基本移栽基質(zhì)，比較不同肥料濃度對金線蓮移栽的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明花多多1號的4000倍液與花多多10號的3000倍液為適宜肥料濃度。
　?、墼谇皟刹皆囼?yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行春季移栽試驗(yàn)，來對比春季和秋季兩種季節(jié)對金線蓮移栽的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明秋季比春季更適合金線蓮的移栽。
　　3、福建戴云山金線蓮組培苗遺傳穩(wěn)定性的ISSR分析
　　本試驗(yàn)選取0代、3代、6代、9代、12代、15代的金線蓮組培苗進(jìn)行遺傳穩(wěn)定性的I

9、SSR檢測。篩選出11條隨機(jī)引物對金線蓮的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，共擴(kuò)增出94條譜帶，0代、3代、6代、9代、12代、15代的變異率分別為10.64%、10.64%、8.51%、12.77%、11.70%、17.02%。0-15代的遺傳相似性系數(shù)介于0.819-0.915之間，其遺傳相似性系數(shù)很大。這說明福建戴云山金線蓮雖然在組織培養(yǎng)的繼代過程中發(fā)生了一定程度的變異，但是其遺傳性狀依然相對穩(wěn)定。
　　4、福建戴云山金線蓮工廠化育苗模

10、式的建立與經(jīng)濟(jì)效益分析
　　福建戴云山金線蓮工廠化育苗主要技術(shù)鏈條為：無菌株系的建立→試管苗增殖培養(yǎng)（芽苗增殖或根狀莖增殖）→試管苗生根壯苗培養(yǎng)→煉苗→穴盤移栽→上盆→銷售。主要技術(shù)參數(shù)為：無菌株系的建立（0.1%HgCl2消毒10 min）；增殖系數(shù)7.76（以芽苗增殖為例，以1/2MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.3 mg/L為培養(yǎng)基）；生根與壯苗不是同步進(jìn)行（生根以1/2MS+IBA1.0 mg/L+NAA0.3 m

11、g/L為培養(yǎng)基），但是壯苗是在生根優(yōu)化基質(zhì)的基礎(chǔ)上進(jìn)行的（壯苗以1/2MS+瓊脂0.6%+NAA0.3 mg/L+IBA1.0 mg/L+白糖2%+馬鈴薯10%+香蕉10%為培養(yǎng)基），其生根率可達(dá)100%，移栽成活率為95%以上（移栽基質(zhì)為：泥炭土：椰糠：樹皮：沙=3:3:1:2）。增殖和生根期間的污染率為5%，壯苗期間為10%。按照通過試驗(yàn)取得的技術(shù)參數(shù)，以年產(chǎn)100萬株苗為例進(jìn)行了金線蓮工廠化育苗的效益分析?？芍?，所用的培養(yǎng)基配制成

12、本、電費(fèi)、水費(fèi)、人工費(fèi)、易耗品費(fèi)用、折舊費(fèi)以及移栽成本共計(jì)390511.58元，每株苗成本為0.39元，按市場價(jià)格每株0.6元，可獲利209488.42元。
　　其中發(fā)現(xiàn)水電費(fèi)用最高，為172710.83元，占總成本的44.23%。人工費(fèi)次之，為134115.75元，占總成本的34.34%。再者是折舊費(fèi)，占到了11.42%。在總的成本中，培養(yǎng)基配制費(fèi)用一共占到了4.88%，移栽基質(zhì)以及穴盤比例占到了4.62%，易耗品費(fèi)用占0.51