西羅莫司對(duì)提高小口徑異種移植血管性能的初步研究.pdf

1、第一部分:目的：利用去污劑-酶消化法[8-9]對(duì)犬頸動(dòng)脈進(jìn)行脫細(xì)胞并聯(lián)合肝素處理，構(gòu)建小口徑異種移植血管，建立異種動(dòng)物移植模型以觀察移植血管遠(yuǎn)期通暢效果。
　　 方法：
　　 1.取熱缺血時(shí)間小于5分鐘的犬頸動(dòng)脈，用含青霉素鉀的生理鹽水沖洗管腔，輕柔剝離外層疏松結(jié)締組織。將血管材料截成5cm 長(zhǎng)放入4℃Hanks 液中備用。血管材料隨機(jī)分為三組：A組（新鮮犬頸動(dòng)脈）、B組（犬頸動(dòng)脈僅脫細(xì)胞處理）、C組（脫細(xì)胞后的犬頸動(dòng)脈

2、結(jié)合肝素處理）。
　　 2.建立異種動(dòng)物移植模型：成年家兔8只，體重2.2～3.0kg，雌雄不限，作自身配對(duì)：左側(cè)頸動(dòng)脈為甲組，移植B組血管材料；右側(cè)頸動(dòng)脈為乙組，移植C組血管材料。
　　 觀察指標(biāo)：取三組樣本進(jìn)行電鏡觀察，評(píng)價(jià)樣本的總體形態(tài)；對(duì)B、C兩組樣本進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色，觀察肝素結(jié)合效果。術(shù)后5天B 型超聲觀察移植血管的通暢情況。術(shù)后5天從原切口取B組樣本進(jìn)行HE 染色，觀察有無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 結(jié)果：

3、掃描電鏡觀察：A組樣本內(nèi)表面覆蓋完整的內(nèi)皮細(xì)胞，細(xì)胞排列緊密。B、C兩組經(jīng)脫細(xì)胞處理后，內(nèi)皮細(xì)胞去除徹底，并呈纖維孔狀結(jié)構(gòu)；甲苯胺藍(lán)染色：C組管壁染色陽(yáng)性，B組染色陰性；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)術(shù)中血管吻合良好，未見(jiàn)明顯滲漏。8只家兔術(shù)后均成活，無(wú)頭頸歪斜，頸動(dòng)脈搏動(dòng)良好；B 超觀察：8只家兔兩側(cè)移植血管均無(wú)血腫和管腔阻塞；HE 染色未見(jiàn)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 結(jié)論：去污劑-酶消化法脫細(xì)胞效果徹底，細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）保護(hù)好；肝素結(jié)合良好，覆

4、蓋于移植血管壁全層；肝素處理的血管樣本可以有效的防止血栓形成，并有較好的抗炎癥反應(yīng)作用。
　　 第二部分:目的：探索和評(píng)價(jià)脫細(xì)胞聯(lián)合肝素處理的小口徑異種移植血管，進(jìn)一步結(jié)合西羅莫司，并建立兔頸動(dòng)脈旁路移植模型以觀察術(shù)后移植血管內(nèi)膜增生的情況。
　　 方法：
　　 1.將脫細(xì)胞聯(lián)合肝素處理的犬頸動(dòng)脈進(jìn)一步結(jié)合西羅莫司，并分為兩組：A組（對(duì)照組，脫細(xì)胞并結(jié)合肝素）和B組（西羅莫司組，脫細(xì)胞并結(jié)合肝素+西羅莫司處理）。

5、
　　 2.兔頸動(dòng)脈旁路移植模型的建立：健康家兔16只，隨機(jī)分為2組（每組8只），利用兔頸動(dòng)脈旁路移植模型，分別移植A組和B組的血管進(jìn)行比較。
　　 觀測(cè)指標(biāo)：術(shù)后分別于1、2、4、8周取血，采用HPLC 法檢測(cè)B組移植血管中西羅莫司的含量。術(shù)后3個(gè)月超聲檢測(cè)移植血管通暢情況。術(shù)前取A、B兩組樣本行免疫組織化學(xué)染色。術(shù)后從原手術(shù)切口取A、B兩組樣本免疫組織化學(xué)染色，觀察兩組內(nèi)膜增生情況。
　　 HE 染色觀察內(nèi)膜

6、增生程度。
　　 結(jié)果：術(shù)后16只家兔均存活，頭頸無(wú)歪曲，術(shù)側(cè)頸動(dòng)脈搏動(dòng)好。移植血管縫合性能良好，吻合口未見(jiàn)滲漏。B組8周后仍可檢測(cè)到西羅莫司，且含量呈逐漸降低趨勢(shì)。術(shù)后3個(gè)月超聲顯示，A組部分血管（2/8）斑塊形成，管腔狹窄，B組血管無(wú)明顯狹窄（P<0.05）。
　　 免疫組織化學(xué)染色：術(shù)前A、B兩組均不見(jiàn)內(nèi)皮細(xì)胞。術(shù)后3個(gè)月A組血管內(nèi)表面可見(jiàn)新生內(nèi)皮細(xì)胞；HE 染色提示，B組內(nèi)膜增生程度較A組輕（A、B兩組內(nèi)膜/中膜