枇杷葉中靶向調(diào)控核受體Nur77抗糖尿病成分的分離.pdf

1、本課題組前期篩選研究發(fā)現(xiàn)含有多種三萜酸類成分的枇杷葉提取物具有靶向調(diào)節(jié)孤兒核受體Nur77抗糖尿病的潛力。我們?cè)谇捌谘芯抗ぷ鞯幕A(chǔ)上，指向性地分離篩選枇杷葉中靶向調(diào)控Nur77并具有抗糖尿病作用的三萜酸類成分。實(shí)驗(yàn)中，我們首先將枇杷葉乙醇提取物的正丁醇萃取分層經(jīng)大孔樹脂吸附色譜、硅膠正相和ODS反相柱層析細(xì)分，再用HPLC液相制備的方法分離純化得到四種三萜酸類化合物，經(jīng)1HNMR、13CNMR、DEPT等波譜分析手段及參考文獻(xiàn)對(duì)照鑒定，

2、確定四種化合物分別為科羅索酸(CA)、烏索酸(UA)、齊墩果酸(OA)和山楂酸(MA)。接著我們采用雙熒光素酶報(bào)告基因分析技術(shù)檢測(cè)分離的化合物對(duì)Nur77的轉(zhuǎn)錄激活作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)科羅索酸、烏索酸及齊墩果酸在報(bào)告基因系統(tǒng)中均能結(jié)合并影響Nur77的轉(zhuǎn)錄激活，其中科羅索酸能顯著地激活Nur77，烏索酸的激活作用弱于科羅索酸，然而齊墩果酸卻表現(xiàn)出一定的抑制激活的作用。進(jìn)一步的逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和蛋白質(zhì)印跡(Western B

3、lot)實(shí)驗(yàn)表明，在肝和脂肪細(xì)胞中，不論是在mRNA還是在蛋白質(zhì)水平，科羅索酸均濃度依賴地上調(diào)Nur77的表達(dá)。此外，蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)還表明科羅索酸在上調(diào)Nur77表達(dá)的同時(shí)下調(diào)ACC(乙酰輔酶A羧化酶)mRNA的表達(dá)，促進(jìn)了ACC的蛋白磷酸化，從而抑制了ACC的作用，說明科羅索酸可能具有失活A(yù)CC，減少體內(nèi)脂肪堆積的作用。干擾Nur77基因表達(dá)發(fā)現(xiàn)，科羅索酸失去促進(jìn)ACC磷酸化的作用，因此說明科羅索酸對(duì)ACC、P-ACC的調(diào)控可能是依賴