胃、十二指放射性腸損傷的臨床觀察與實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、胰腺惡性腫瘤發(fā)病率日益升高，嚴(yán)重危及患者的生命，由于胰腺癌發(fā)病隱匿，早期癥狀不明顯，患者臨床就診時(shí)多為晚期，手術(shù)切除率只有14.2％，大多數(shù)患者失去手術(shù)機(jī)會(huì)。胰腺癌對(duì)化療不甚敏感，因而放射治療成為胰腺癌的重要治療手段之一。胰腺癌的根治性放射治療在考慮腫瘤自身放射生物學(xué)因素外，應(yīng)充分評(píng)估放療可能危及周圍正常組織器官及功能。放射治療不僅要達(dá)到胰腺癌良好的局控，同時(shí)要降低腫瘤周圍正常組織的放射性損傷。由于胰腺與胃、十二指腸的解剖關(guān)系，胰腺癌放

2、射治療不可避免對(duì)胃、十二指腸產(chǎn)生放射性損傷。既往放射性胃腸炎的研究多關(guān)注于空回腸及結(jié)直腸，是基于傳統(tǒng)放療多用于直腸癌、前列腺癌及婦科腫瘤。目前有關(guān)胃、十二指腸的放射性損傷和治療研究報(bào)道較少。文獻(xiàn)報(bào)道放射性腸炎的發(fā)生和細(xì)胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α關(guān)系密切。我們前期研究及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道胰腺癌在接受立體定向放療早期出現(xiàn)胃腸道反應(yīng)達(dá)70％，急性胃十二指腸粘膜糜爛及潰瘍達(dá)7％，晚期出現(xiàn)胃十二指腸潰瘍和梗阻分別為17％、9％?；谏鲜霰尘?/p>

3、，我們初步觀察了6例胰腺癌患者放射治療后胃鏡下胃、十二指腸粘膜的損傷情況，同時(shí)觀察給予抑酸藥和胃腸粘膜保護(hù)劑后患者臨床癥狀的改善情況。在6例胰腺癌患者中均出現(xiàn)3級(jí)放射性腸炎，表現(xiàn)為上腹部脹痛、腹瀉、惡心、嘔吐伴黑便。胃鏡檢查可見Ⅳ級(jí)放射性損傷，表現(xiàn)為十二指腸球部、降段粘膜明顯充血、水腫，潰瘍形成，表面覆著白苔。給予抑酸藥法莫替丁和胃腸粘膜保護(hù)劑鋁鎂加混懸液后臨床癥狀均有改善。初步觀察顯示胃、十二指腸放射性損傷是胰腺癌放療的重要并發(fā)癥之一

4、，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量。為進(jìn)一步觀察胃、十二指腸粘膜放射性損傷及抑酸藥法莫替丁和胃腸粘膜保護(hù)劑鋁鎂加混懸液對(duì)胃、十二指腸粘膜的保護(hù)作用，我們建立了胃、十二指腸放射性損傷的動(dòng)物模型，以期為臨床防護(hù)胃、十二指腸放射性損傷提供理論依據(jù)。
　　 目的:1.建立和臨床較為接近的小鼠急性放射性腸炎的模型。2.探討60CO射線對(duì)胃、十二指腸放射損傷后，使用抑酸藥法莫替丁聯(lián)合胃腸粘膜保護(hù)劑鋁鎂加混懸液的療效及修復(fù)作用機(jī)制，為兩種藥物干預(yù)治療

5、胃、十二指腸放射性損傷提供新的理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:1.建立急性放射性腸炎的小鼠模型選用雌性Balb/c小鼠93只，稱重后隨機(jī)分為7組，0Gy照射組（13只）、4.5Gy照射組（13只）、6.0Gy照射組(13只)、9Gy照射組（13只）、12Gy照射組（13只）、13.5Gy照射組（13只）、15Gy照射組（15只），各個(gè)劑量組分別給予60Co射線腹部一次性照射，照射后觀察小鼠一般情況，如精神、活動(dòng)、大便、體重等，用活

6、動(dòng)評(píng)分法評(píng)價(jià)小鼠健康狀況。在照射后第3.5d、7d處死小鼠，取不同照射劑量下小鼠胃、十二指腸組織固定、包埋、切片、HE染色，光鏡下觀察粘膜結(jié)構(gòu);取脾和腸系膜淋巴結(jié)研磨，提取細(xì)胞總mRNA，反轉(zhuǎn)為cDNA，通過(guò)Real-timePCR方法檢測(cè)炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α的變化，通過(guò)ELISA方法檢測(cè)血清中IL-6，IL-1β，TNF-α等炎性因子的表達(dá)變化。2.在急性放射性腸炎模型的基礎(chǔ)上，給予法莫替丁和鋁鎂加混懸液，觀察其對(duì)

7、胃、十二指腸放射性損傷的保護(hù)作用。選用清潔級(jí)Balb/c雌性小鼠78只，按體重隨機(jī)分為4組:A組空白對(duì)照組(19只):無(wú)照射及藥物干預(yù)、B組空白藥物干預(yù)組（19只）:無(wú)照射，有藥物干預(yù)，法莫替丁0.5ml/只，鋁鎂加混懸液0.3ml/只灌胃、C組照射組（20只）:12Gy60CO射線單次腹部照射+生理鹽水0.8ml/只灌胃、D組照射藥物干預(yù)組（20只）:12Gy60CO射線單次腹部照射+藥物干預(yù)，法莫替丁0.5ml/只，鋁鎂加混懸液0.

8、3ml/只灌胃。所有干預(yù)組均在照射前2天開始給予藥物或生理鹽水灌胃，至照射后第3.5天結(jié)束，照射采用60Co射線小鼠全腹一次性照射，照射后第3.5天，禁食12小時(shí)后脫頸法處死小鼠，解剖取各組小鼠十二指腸組織固定、包埋、切片、HE染色，光鏡下觀察腸粘膜及絨毛組織形態(tài)學(xué)變化，用改良的Chiu氏評(píng)分法評(píng)價(jià)腸粘膜損傷程度;取脾和腸系膜淋巴結(jié)研磨，提取細(xì)胞總mRNA，反轉(zhuǎn)為cDNA，通過(guò)Real-timePCR方法檢測(cè)脾和腸系膜淋巴結(jié)中細(xì)胞因子I

9、L-6，IL-1β，TNF-α的變化;取小鼠血清通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)方法檢測(cè)血清中IL-6，IL-1β，TNF-α等炎性因子的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:1.12Gy60CO腹部一次性照射，小鼠十二指腸病理表現(xiàn)符合放射性腸炎動(dòng)物腸粘膜損傷的要求，Real-timePCR方法檢測(cè)脾、腸系膜淋巴結(jié)中炎性因子IL-6，IL-1β，TNF-α表達(dá)均有升高(P＜0.05)，ELISA法檢測(cè)外周血血清中炎性因子IL-6，IL-1β，T

10、NF-α表達(dá)均有升高(P＜0.05)，癥狀表現(xiàn)典型且死亡率不高，12Gy60Co射線小鼠全腹一次性照射，成功建立了和臨床接近的急性放射性腸炎的小鼠模型;2.在急性放射性腸炎模型的基礎(chǔ)上，給予法莫替丁聯(lián)合鋁鎂加混懸液干預(yù)，藥物干預(yù)組與照射組比較小鼠體重下降較輕，Real-timePCR方法檢測(cè)脾和腸系膜淋巴結(jié)中炎性因子IL-6，IL-1β，TNF-α的表達(dá)變化，藥物干預(yù)組較照射組均有下降，其中IL-6，IL-1β在藥物干預(yù)組和照射組之間表

11、達(dá)差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);ELISA法檢測(cè)外周血血清中炎性因子IL-6，IL-1β，TNF-α表達(dá)變化，藥物干預(yù)組較單純照射組比較均有下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。光鏡下觀察十二指腸粘膜絨毛高度、隱窩深度的變化，藥物干預(yù)組絨毛高度較單純照射組高(P＜0.05)，藥物干預(yù)組隱窩深度較照射組深(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:1.成功建立了小鼠急性放射性腸炎模型，模型中脾、腸系膜淋巴結(jié)和外周血血清中細(xì)胞因子IL-