大鼠腎臟缺血再灌注損傷過程中水通道蛋白-2的表達(dá)變化.pdf

1、目的:腎臟作為高灌注器官，對(duì)缺血非常敏感，容易發(fā)生缺血再灌注損傷（ischemical reperfusion injury, IRI）。腎IRI是缺血性急性腎功能衰竭(acute renal failure，ARF)的重要損傷環(huán)節(jié)，其損傷的病理生理機(jī)制非常復(fù)雜，目前對(duì)腎IRI病理生理機(jī)制的研究主要集中在腎小管上皮細(xì)胞的凋亡和壞死、自由基的損傷作用、鈣超載、能量代謝障礙、炎性介質(zhì)和粘附分子、細(xì)胞因子等方面，而對(duì)腎臟存在的水通道蛋白(AQ

2、Ps)在這一病理生理?xiàng)l件下的作用認(rèn)識(shí)不足。為此，本研究通過建立大鼠的腎臟IRI模型觀察其AQP2表達(dá)變化與腎功能的關(guān)系，探討ARF時(shí)多尿與AQP2表達(dá)間的相關(guān)性，為臨床防治ARF提供理論依據(jù)。
　　方法:選取50只健康成年的雄性SD大鼠，分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組通過腹腔分離右側(cè)腎蒂用無損傷動(dòng)脈夾夾閉，45min后重新恢復(fù)腎臟血液灌注來建立模型，對(duì)照組僅游離右側(cè)腎蒂而不進(jìn)行夾閉，45min后關(guān)腹。實(shí)驗(yàn)組分別在1天、3天、5天、7天

3、初始并收集尿液、全血和左右側(cè)腎臟，每組10只;對(duì)照組在1天后處死大鼠并收集標(biāo)本。尿液用于檢測(cè)24h尿量和尿比重;全血分離出血清后用于檢測(cè)肌酐、尿素氮的變化;腎臟用于HE、免疫組化、QRT-PCR檢測(cè)。通過HE染色觀察腎臟的病理學(xué)改變;用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)AQP2的表達(dá)水平及分布情況;通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)大鼠腎臟內(nèi)AQP2mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1尿液變化:(1)24h尿量變化:缺血再灌注模型大鼠術(shù)后不同

4、時(shí)間的24h尿量變化各不相同。術(shù)后1天模型大鼠24h尿量異常增多，到術(shù)后3天24h尿量達(dá)到最高值，而后逐漸降低，隨著術(shù)后時(shí)間越長(zhǎng)24h尿量慢慢減少，至術(shù)后第7天24h尿量恢復(fù)至正常。假手術(shù)組大鼠24h尿量比術(shù)后1天尿量少，但比7天組高。各組尿量變化均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(2)尿比重變化:缺血再灌注組大鼠術(shù)后1天尿比重的水平降低，至術(shù)后第3天，尿比重的水平降低至最低水平而后逐漸升高，術(shù)后第7天，尿比重升高至正常水平。假手術(shù)組大鼠

5、尿比重比7天和術(shù)后1天均高。術(shù)后1天和7天的相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2腎功能指標(biāo):在缺血再灌注模型組尿素氮和肌酐在術(shù)后大鼠腎臟中的表達(dá)升高，在術(shù)后第3天，尿素氮和肌酐的水平達(dá)到最高，而后逐漸降低，至術(shù)后第7天，尿素氮和肌酐的水平恢復(fù)至正常值。尿素氮在術(shù)后1天和術(shù)后5天的相比、7天和假手術(shù)1天組相比變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。肌酐在7天和假手術(shù)1天組中相比變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3病

6、理學(xué)觀察:缺血再灌注大鼠術(shù)后的腎臟HE染色可見明顯腎小管變性、空泡和壞死。
　　4免疫組化:假手術(shù)組腎臟中左右側(cè)AQP2的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。缺血再灌注模型大鼠雙側(cè)腎臟中AQP2在術(shù)后不同時(shí)間的表達(dá)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在模型大鼠左側(cè)腎臟中AQP2在術(shù)后不同時(shí)間中的表達(dá)有差異，術(shù)后第1天，左側(cè)腎臟AQP2的表達(dá)異常升高(P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)，術(shù)后第3天達(dá)到最高，而后隨著術(shù)后時(shí)間延長(zhǎng)，左側(cè)腎臟AQ

7、P2的表達(dá)逐漸降低，到術(shù)后第7天，AQP2的表達(dá)恢復(fù)至正常水平。
　　5 QRT-PCR:結(jié)果同免疫組化。假手術(shù)組大鼠腎臟AQP2的mRNA無顯著性差異(P＞0.05)。模型組大鼠雙側(cè)腎臟中AQP2 mRNA的表達(dá)明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。模型組大鼠左側(cè)腎臟AQP2的mRNA在術(shù)后第1天表達(dá)升高，到術(shù)后第3天AQP2mRNA的表達(dá)達(dá)到最高水平，而后AQP2mRNA的表達(dá)逐漸降低。到術(shù)后第7天恢復(fù)至正常水平。
　

8、　結(jié)論:
　　1缺血再灌注模型大鼠的腎小管有明顯損傷，HE染色顯示腎小管有明顯的變性、空泡和壞死，說明隨著缺血再灌注時(shí)間變化，腎功也相應(yīng)的發(fā)生變化。綜合以上結(jié)果提示缺血再灌注損傷是導(dǎo)致急性腎小管壞死和腎功能衰竭的重要原因之一。
　　2試驗(yàn)大鼠腎臟缺血再灌注損傷后腎小管上皮細(xì)胞AQP2表達(dá)減少所導(dǎo)致的水重吸收障礙，可能是急性腎衰竭時(shí)導(dǎo)致尿量增多、尿比重降低的重要因素之一。
　　3試驗(yàn)大鼠腎臟缺血再灌注損傷后腎功能發(fā)生損傷