響應水分脅迫的稻水孔蛋白.pdf

1、響應水分脅迫的稻水孔蛋白干旱缺水是全球農業(yè)面臨的嚴重問題，也是制約我國農業(yè)和經(jīng)濟發(fā)展的重要因素，作物抗旱性已經(jīng)成為植物逆境研究中的重要問題。為了探究作物的抗旱機制，本文研究了陸稻和水稻在水分脅迫下的不同形態(tài)和生理變化、陸稻和水稻質膜水孔蛋白家族基因對水分脅迫和ABA的不同響應，并運用轉基因技術研究了水孔蛋白的生理功能，實驗主要取得如下結果：(1)通過對陸稻(中旱3號)和水稻(秀水63)在20﹪PEG水分脅迫下的生理比較，研究了陸稻和水稻

2、的不同抗旱生理機制。相對秀水63，相同強度的水分脅迫處理使中旱3號的葉片明顯卷曲，同時，我們發(fā)現(xiàn)中旱3號的葉片含水量、相對累積蒸騰量較秀水63顯著下降。汞離子是許多水孔蛋白的抑制劑，通過汞離子抑制實驗可以初步驗證水孔蛋白的功能。通過用水孔蛋白抑制劑HgCl2短時間處理陸稻和水稻的根系，在未受脅迫時，汞處理使中旱3號和秀水63的相對蒸騰量顯著下降；在脅迫條件下中旱3號的蒸騰量顯著受到抑制，而對秀水63的影響不大。水分脅迫處理使中旱3號和秀

3、水63的葉片的滲透勢下降幅度相似，秀水63根的滲透勢的下降較中旱3號更為迅速和劇烈，說明在水分脅迫下，秀水63的根可能具有更強的滲透調節(jié)能力。脅迫處理顯著地誘導了中旱3號葉片合成大量的脯氨酸，但在秀水63的葉和兩者的根中脯氨酸的含量變化不大，推測脯氨酸為中旱3號葉片的滲透調節(jié)物質之一，而根的滲透調節(jié)可能是通過其他途徑來完成。ABA是植物抗旱過程中的重要信號分子，在脅迫條件下植物體內大量積累ABA可以引起氣孔關閉并增加根系的水導度從而提高

4、植物的抗旱性。 水分脅迫處理使中旱3號葉和根的ABA含量明顯增加，而秀水63的葉和根的ABA含量基本不變。綜合以上結果，陸稻(中旱3號)和水稻(秀水63)對水分脅迫的生理響應明顯不同，陸稻可能以避旱為主(如增加根系吸水能力、減少水分散失)，而水稻可能以耐旱為主(如滲透調節(jié))，水孔蛋白和ABA則可能在陸稻的避旱機制中起了一定的作用。 (2)為了進一步探究水孔蛋白和ABA在陸稻和水稻適應水分脅迫中的作用，我們分別檢測了陸稻和

5、水稻在水分脅迫和外源ABA處理條件下質膜水孔蛋白的表達情況。在蛋白水平，中旱3號葉和根的質膜水孔蛋白含量明顯高于秀水63。在20﹪PEG處理10h后，中旱3號葉和根的質膜水孔蛋白含量明顯增加，而秀水63的根的質膜水孔蛋白含量也比處理前增加，但葉的質膜水孔蛋白含量在脅迫前后基本不變。在mRNA水平，20﹪PEG滲透脅迫下，OsPIP1；2、OsPIP1；3、OsPIP2；1和OsPIP2；5在中旱3號的根中表達上調，OsPIP1；2和Os

6、PIP1；3在中旱3號的葉片被上調；而秀水63在滲透脅迫下沒有水孔蛋白基因被明顯上調；同時外源ABA處理也誘導了OsPIP1；2和OsPIP2；5的上調。由以上結果，我們推測OsPIP1；2和OsPIP2；5的表達可能依賴ABA，而OsPIP1；3和OsPIP2；1的表達可能不依賴ABA。 (3)為了進一步了解水孔蛋白在稻抗旱中的作用，我們在水稻中過表達水孔蛋白OsPIP1；1和OsPIP1；3，然后對轉基因植株進行了生理分析。

7、考慮到水稻是單子葉植物，我們選用了來自玉米的組成型強啟動子(UBI-promoter)。隨后利用根癌農桿菌介導的方法將UBI∷OsPIP1；1和UBI∷OsPIP1；3分別轉入水稻。通過PCR檢測確定轉化水稻成功。通過realtimeRT-PCR檢測，轉UBI∷OsPIP1；1和UBI∷OsPIP1；3植株的的表達量明顯高于轉空載體的對照。同時，我們發(fā)現(xiàn)在水分充足的條件下，過表達OsPIP1；1和OsPIP1；3加速了種子萌發(fā)，并在隨后