福建柏響應(yīng)鹽脅迫差異蛋白分析.pdf

1、福建柏(Fokienia hodginsii)是柏科(Cupressaceae)福建柏屬(Fokienia)常綠喬木，國(guó)家Ⅱ級(jí)保護(hù)植物，為福建省珍稀鄉(xiāng)土樹(shù)種，福建柏樹(shù)形優(yōu)美似寶塔狀，木材材質(zhì)優(yōu)良，且具有耐瘠薄的生長(zhǎng)特性。鹽害是植物最主要的非生物脅迫因子之一，影響著福建柏的生長(zhǎng)與分布。利用蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法，對(duì)福建柏響應(yīng)鹽脅迫相關(guān)蛋白進(jìn)行分析，對(duì)于福建柏的耐鹽機(jī)理有重要的意義。本研究以福建柏為材料，利用雙向電泳技術(shù)及質(zhì)譜技術(shù)對(duì)福建柏鹽脅

2、迫差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴建立福建柏雙向電泳技術(shù)體系。采取了TCA/丙酮法、酚提取法、以及TCA/丙酮法-酚提取法三種蛋白提取方法，7 cm長(zhǎng)pH3-10， pH5-8，pH4-7三種IPG膠條、等電聚焦參數(shù)設(shè)定為20000 VH，25000 VH，30000 VH、丙烯酰胺凝膠分離膠濃度設(shè)定為10％與12.5%進(jìn)行單因素分析，對(duì)福建柏雙向電泳技術(shù)進(jìn)行優(yōu)化。采用三氯乙酸/丙酮-酚法提取福建柏葉片的蛋白點(diǎn)多且

3、圖像清晰，pH4-7 IPG膠條最適合福建柏葉片蛋白的分離，等電聚焦參數(shù)設(shè)定為25000 Vh，濃度為10%的分離膠進(jìn)行福建柏雙向電泳最好。⑵分析鹽脅迫引起的差異蛋白質(zhì)發(fā)現(xiàn)，福建柏在不同濃度鹽脅迫條件下蛋白質(zhì)豐度變化是不同的，通過(guò)軟件分析蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜，得到表達(dá)變化明顯的蛋白質(zhì)，在脅迫條件下，有的是上調(diào)表達(dá)，有的是下調(diào)表達(dá)，不同蛋白的豐度變化是有顯著差異的。用軟件選取有效性T檢驗(yàn)99%的蛋白，形狀以及分離度較好并有兩倍以上差異的蛋白

4、點(diǎn)。結(jié)果有16個(gè)蛋白質(zhì)在鹽脅迫處理?xiàng)l件下呈現(xiàn)上調(diào)表達(dá)，5個(gè)蛋白質(zhì)在鹽脅迫處理下調(diào)表達(dá)。表明福建柏在鹽脅迫條件下蛋白質(zhì)差異是顯著的。在進(jìn)行2-DE實(shí)驗(yàn)中，每個(gè)蛋白樣品都進(jìn)行3次以上重復(fù)實(shí)驗(yàn)，以去除電泳過(guò)程中發(fā)生的誤差。⑶在表達(dá)量上調(diào)差異中，蛋白質(zhì)大多集中在酸性端，密集集中在酸性pH4-5之間，位于丙烯酰胺凝膠中部。而在蛋白質(zhì)表達(dá)量下降的5個(gè)點(diǎn)中，分布比較分散。對(duì)雙向電泳找出的21個(gè)差異蛋白進(jìn)行質(zhì)譜分析，檢測(cè)成功20個(gè)蛋白，經(jīng)過(guò)Mascot