楊樹轉(zhuǎn)β-1,3-葡聚糖酶(BG2)及反義磷脂酶D-,γ-(PLD-,γ-)基因的研究.pdf

1、該研究以G1為實(shí)驗(yàn)材料,以其葉片為外植體進(jìn)行再生培養(yǎng),系統(tǒng)地研究了激素濃度、葉片生理狀態(tài)、光照條件等諸多因素對(duì)葉片再生的影響,建立了黑楊葉片培養(yǎng)誘導(dǎo)不定芽的高頻再生體系.在此基礎(chǔ)上,分別用攜帶BG2基因和反義磷脂酶D<,γ>基因(PLD<,γ>)的根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化葉片,通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)化方法和條件的探索,建立了黑楊G1的遺傳轉(zhuǎn)化體系.研究結(jié)果表明,不同激素濃度配比和pH值對(duì)芽再生有重要影響,最終以在MS基本培養(yǎng)基中附加0.5mg/L 6-BA

2、,0.1mg/L NAA的分化培養(yǎng)基可以高頻誘導(dǎo)不定芽的產(chǎn)生.在葉片遠(yuǎn)軸面上劃三刀,造成傷口,以該面接觸培養(yǎng)基,接種在上述分化培養(yǎng)基上.經(jīng)15天光培養(yǎng)后可以看到不定芽開始形成,出現(xiàn)的高峰期在接種后的20-30天.通常不定芽成簇狀密集生長(zhǎng),散布在葉片的各個(gè)部位,但以切口部位較多,芽分化率高達(dá)98％以上.在出現(xiàn)不定芽的部位基本無(wú)愈傷組織,或只有很少愈傷形成.待小芽長(zhǎng)至1-2cm,將其從葉片上切下,轉(zhuǎn)到壯苗培養(yǎng)基(MS+0.8mg/L KT+