通絡方劑治療糖尿病肝損害的療效及其可能機制.pdf

1、研究背景及目的:
　　 越來越多的研究顯示糖尿病及其并發(fā)癥與氧化應激之間有緊密的聯(lián)系。糖尿病慢性并發(fā)癥發(fā)病的統(tǒng)一機制學說認為：多元醇通路激活、蛋白質非酶糖化增加、蛋白激酶C激活、己糖胺途徑激活等4條引起糖尿病各并發(fā)癥的共同通路實質上都是高糖誘導的超氧化物過表達的結果。糖尿病肝損害是指糖尿病引起的肝臟功能和組織學變化的病變，屬于糖尿病慢性并發(fā)癥范疇。氧化應激與脂質過氧化增強時，不僅可以直接損傷肝細胞、誘導炎癥細胞對脂質的趨化產生炎

2、癥浸潤，還能激活肝貯脂細胞(星形細胞)促進膠原纖維合成，導致纖維化甚至肝硬化?？寡趸瘎┛蓽p少自由基的產生或直接淬滅機體產生的自由基，增強機體的抗氧化能力。因此，采用抗氧化劑治療糖尿病以改善機體異常的病理生理狀況，成為現(xiàn)今治療糖尿病及其并發(fā)癥的重要方法之一。多種抗氧化劑如維生素C、E和α-硫辛酸等可對糖尿病并發(fā)癥產生有益的影響。通絡方劑(Tongluo Recipe，TLR)是中藥復方制劑，由人參、水蛭、蜈蚣、全蝎、土鱉蟲和赤芍等組成?，F(xiàn)

3、代藥理研究表明，人參的主要活性成分人參皂甙具有降血脂，抗氧化，抗凋亡作用；水蛭有利尿、消除尿蛋白的作用，并能改善微循環(huán)；土鱉蟲和全蝎具有抗凝、抗血栓形成的作用；赤芍具有降低全血濃度、抑制血小板聚集，降低血小板動附性，降低纖維蛋白原，限制血栓形成時間等作用。本課題前期研究表明通絡方劑能通過其抗氧化和改善血流動力學等作用減輕糖尿病大鼠并發(fā)的腎臟、血管內皮、心肌細胞、腦海馬組織等的損傷。通絡方劑是否對糖尿病肝損害具有治療作用，目前尚無相關報道

4、。本實驗使用鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)制備糖尿病大鼠模型，觀察其對實驗性糖尿病鼠血清肝功能、肝纖維化相關指標，肝組織氧化應激及肝臟形態(tài)學改變的影響，旨在探討通絡方劑對糖尿病肝損害的療效及其可能機制。
　　 研究對象及方法:
　　 以SD大鼠為研究對象，予鏈脲佐菌素60 mg/kg一次性腹腔注射，1周后測血糖≥16.7mmol/L為糖尿病模型制備成功。將糖尿病模型鼠以隨機數(shù)字表法分為4組(每組10只

5、)：(1)糖尿病對照組(DM)；(2)通絡方劑小劑量組[TL，TLR劑量為0.5g/(kg·d)]；(3)通絡方劑中等劑量組[TM，TLR劑量為1.0g/(kg·d)]；(4)通絡方劑大劑量組[TH，TLR劑量為2.0g/(kg·d)]。同時取10只大鼠作為正常對照組(CN)。實驗周期為12周。
　　 1.檢測各組大鼠體質量、血糖、血脂[甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)]
　　 2.檢測血清肝功能指標[丙氨酸轉氨

6、酶(ALT)、天冬氨酸轉氨酶(AST)、堿性磷酸酶(AKP)]，血清肝纖維化指標[透明質酸(HA)、Ⅳ型膠原(Ⅳ-c)、層粘連蛋白(LN)、Ⅲ型前膠原(PCIII)]
　　 3.光鏡及透射電鏡觀察肝組織形態(tài)學改變。
　　 4.檢測肝組織氧化應激相關指標[超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)]
　　 結果：
　　 1.糖尿病大鼠血糖及血清三酰甘

7、油顯著升高(P＜0.01)，體質量和血清高密度脂蛋白顯著降低(P＜0.01)。經通絡方劑治療12周后，中高劑量組糖尿病大鼠體質量較未治療鼠有所增加，但沒有統(tǒng)計學意義；糖尿病大鼠的血糖、血脂指標在通絡方劑治療后未見到明顯改變。
　　 2.糖尿病大鼠并發(fā)肝臟損傷，血清肝功能指標ALT、AST及AKP水平均顯著升高(P＜0.01)。經通絡方劑治療12周后，中高劑量組糖尿病大鼠血清ALT、AST水平明顯下降(P＜0.05)，肝損傷得到一

8、定程度的改善。
　　 3.糖尿病大鼠血清肝纖維化指標HA及Ⅳ-c水平顯著升高(P＜0.01)。經通絡方劑治療12周后，高劑量組糖尿病大鼠血清肝纖維化指標HA及Ⅳ-c水平明顯下降(P＜0.05)。
　　 4.光鏡及透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，糖尿病大鼠肝細胞出現(xiàn)明顯的糖尿病特征性病理變化：胞質糖原顆粒明顯增多，胞質內脂滴增多，肝細胞線粒體嵴模糊且基質變密，粗面內質網局部脫顆粒、滑面內質網擴大。同時，糖尿病大鼠出現(xiàn)肝臟纖維化和微血管損

9、傷的病理變化：肝血竇邊緣及肝匯管區(qū)膠原纖維增生，匯管區(qū)血管內皮細胞線粒體腫脹、嵴缺失，部分血管壁增厚，Disse間隙肝貯脂細胞增生。經通絡方劑干預12周后，糖尿病大鼠肝細胞胞質糖原顆粒明顯減少，線粒體嵴變清晰且基質密度降低，粗面及滑面內質網形態(tài)接近正常。糖尿病大鼠肝血竇邊緣及肝匯管區(qū)膠原纖維增生減輕，匯管區(qū)血管內皮細胞形態(tài)及血管壁厚度接近正常，Disse間隙肝貯脂細胞增生減輕。通絡方劑治療使上述病理形態(tài)得到明顯改善。
　　 5.

10、糖尿病大鼠肝組織抗氧化酶SOD、CAT活性均顯著降低(P＜0.01)；GSH-Px水平也有所下降，但差異沒有統(tǒng)計學意義；MDA水平顯著升高(P＜0.01)，肝組織處于過度氧化應激狀態(tài)。經通絡方劑治療12周后，低中高劑量組糖尿病大鼠肝組織SOD活性均顯著增加(P＜0.01)；中高劑量組糖尿病大鼠肝組織MDA水平顯著下降(P＜0.01)，肝組織的氧化應激水平有所下降。
　　 結論：
　　 1.糖尿病大鼠血清肝功能及肝纖維化指

11、標升高，同時出現(xiàn)糖尿病特征性肝臟形態(tài)學改變。通絡方劑治療可顯著降低上述血生化指標異常、明顯改善肝臟病理形態(tài)，對糖尿病肝損害具有一定的治療作用，其治療劑量為2.0g/(kg·d)時療效顯著。
　　 2.糖尿病大鼠肝組織氧化應激水平增高，通絡方劑可增強肝組織抗氧化酶類活性、清除脂質過氧化物，降低肝組織氧化應激水平。
　　 3.糖尿病大鼠糖脂代謝紊亂明顯，通絡方劑治療未見明顯降血糖、血脂作用。故分析通絡方劑對糖尿病肝損害的治療