加巴噴丁治療糖尿病性神經(jīng)痛的療效及其機(jī)制探討.pdf

1、神經(jīng)病理性疼痛(neuropathic pain)簡稱神經(jīng)性疼痛，國際疼痛研究會(huì)(IASP，1994)定義為“周圍或中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)或繼發(fā)性損害或功能障礙引起的疼痛”。糖尿病(diabetes mellitus，DM)是威脅人類健康的常見疾病，糖尿病周圍神經(jīng)病變(diabetic peripheral neuropathy，DPN)是糖尿病常見并發(fā)癥之一。DPN所致的疼痛即糖尿病性神經(jīng)痛(painful diabetic neuropa

2、thy，PDN)，是神經(jīng)病理性疼痛的一個(gè)主要類型，患病人數(shù)多，然而由于其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，到目前為止，臨床上仍缺乏滿意的鎮(zhèn)痛藥物，其治療的滿意率小于≤30％。加巴噴丁(gabapentin，GBP)是一種新型的抗癲癇藥物，臨床研究表明，加巴噴丁治療糖尿病性神經(jīng)痛效果明確，不良反應(yīng)輕微，是治療糖尿病性神經(jīng)痛較為理想的藥物，然而其鎮(zhèn)痛機(jī)制尚未完全明確。有研究認(rèn)為，PDN大鼠脊髓電壓門控鈣離子通道α2δ-1亞單位表達(dá)增加，其表達(dá)上調(diào)與異常

3、性傷害感受的發(fā)生有關(guān)，在神經(jīng)病理性疼痛的形成及維持中發(fā)揮重要作用。而TNF-α作為一種促炎性細(xì)胞因子在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生、發(fā)展中也起重要作用。為進(jìn)一步研究GBP的作用機(jī)制，本課題在第一部分探討了加巴噴丁對(duì)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影響以及對(duì)脊髓電壓門控鈣離子通道α2δ-1亞單位表達(dá)水平的影響；第二部分探討了加巴噴丁對(duì)糖尿病性神經(jīng)痛患者的鎮(zhèn)痛效果以及對(duì)患者血漿TNF-α表達(dá)水平的影響。通過上述動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與臨床試驗(yàn)兩個(gè)方面進(jìn)一步評(píng)估加巴噴丁對(duì)

4、糖尿病性神經(jīng)痛的療效，初步探討加巴噴丁的鎮(zhèn)痛機(jī)制。 第一部分(動(dòng)物實(shí)驗(yàn))加巴噴丁對(duì)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠的鎮(zhèn)痛效果觀察及其對(duì)脊髓鈣離子通道α2δ-1亞單位表達(dá)水平的影響 [目的] 觀察加巴噴丁對(duì)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠痛閾的影響以及對(duì)脊髓電壓門控鈣離子通道α2δ-1亞單位表達(dá)水平的影響。 [方法] 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)：鏈脲菌素(streptozotocin，STZ)腹腔注射建立1型糖尿病模型。以von Frey h

5、airs刺激大鼠足底，觀察糖尿病大鼠機(jī)械痛閾的變化過程。在觀察加巴噴丁治療干預(yù)效果時(shí)，在STZ腹腔注射后28天，篩選機(jī)械縮足閾值(paw withdrawalmechanical threshold，PWMT)≤5.5g糖尿病大鼠，給予100 mg/kg加巴噴丁腹腔注射1次/日，觀察加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果。 形態(tài)學(xué)觀察：STZ腹腔注射后28天，取大鼠腓腸神經(jīng)，透視電鏡觀察神經(jīng)纖維的超微結(jié)構(gòu)。 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)：以Real-ti

6、me PCR和 western blot技術(shù)為方法，觀察糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓α2δ-1亞單位的表達(dá)情況以及加巴噴丁對(duì)α2δ-1亞單位表達(dá)的影響。 [結(jié)果] 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)：(1)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠模型的建立大鼠腹腔注射后14天機(jī)械痛閾開始下降，21天、28天后與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(2)加巴噴丁治療干預(yù)實(shí)驗(yàn)100 mg/kg加巴噴丁的鎮(zhèn)痛效果明確，單次注射后1h糖尿病性神經(jīng)痛大鼠出現(xiàn)短暫的機(jī)械痛閾升

7、高，連續(xù)注射后機(jī)械痛閾呈持續(xù)升高，與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 透視電鏡檢查結(jié)果：在STZ腹腔注射后28天，糖尿病大鼠出現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)膜水腫，可見脫髓鞘改變，髓球形成，部分可見髓鞘缺失，板層間結(jié)構(gòu)疏松。 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)：(1)STZ腹腔注射后28天取大鼠脊髓腰膨大部分，糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓α2δ-1亞單位mRNA和蛋白水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(2)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠分別于加巴噴

8、丁干預(yù)治療后3天、7天、14天取材，在第7天，第14天α2δ-1亞單位mRNA和蛋白水平均出現(xiàn)下調(diào)，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 [結(jié)論] 加巴噴丁作為一種新型的抗癲癇藥物，治療糖尿病性神經(jīng)痛效果明確。本課題研究發(fā)現(xiàn)糖尿病性神經(jīng)痛大鼠脊髓α2δ-1亞單位呈高表達(dá)，加巴噴丁干預(yù)治療后α2δ-1亞單位水平顯著降低，提示α2δ-1亞單位可能參與了糖尿病性神經(jīng)痛的形成及維持，加巴噴丁對(duì)α2δ-1亞單位的下調(diào)作

9、用可能是其鎮(zhèn)痛機(jī)制之一。 第二部分(臨床試驗(yàn))加巴噴丁對(duì)糖尿病性神經(jīng)痛患者的療效以及對(duì)血漿TNF-α表達(dá)水平的影響 [目的] 觀察加巴噴丁對(duì)糖尿病性神經(jīng)痛的療效以及對(duì)患者血漿TNF-α表達(dá)水平的影響。 [方法] 以視覺模擬評(píng)分(VAS)評(píng)定疼痛程度，0分為無痛，10分為劇痛。42例PDN患者按是否服用GBP分為GBP組24例與PDN對(duì)照組18例，糖尿病無神經(jīng)痛患者20例為DM組，成年健康體檢者24

10、例為正常對(duì)照組。觀察糖尿病性神經(jīng)痛組患者治療前、治療兩周后的VAS評(píng)分變化及藥物的副作用。比較治療前后VAS評(píng)分，判定治療效果。ELISA法檢測糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-α濃度，以及加巴噴丁干預(yù)治療后對(duì)其表達(dá)水平的影響。 [結(jié)果] 糖尿病性神經(jīng)痛患者加巴噴丁治療后VAS評(píng)分降低，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。治療過程中有6例出現(xiàn)嗜睡，1例出現(xiàn)眩暈，3例出現(xiàn)無力，均可耐受。糖尿病性神經(jīng)痛患者血漿TNF-