糖尿病神經(jīng)痛大鼠脊髓背角NMDA受體表達(dá)變化.pdf

1、目的:隨著對(duì)糖尿病并發(fā)癥的重視和診斷技術(shù)的發(fā)展,糖尿病神經(jīng)病變(diabetic peripheral neuropathy,DPN)越來越被重視,但其發(fā)生、發(fā)展的病理生理機(jī)制并不十分清楚。NMDA受體作為脊髓興奮性谷氨酸受體系統(tǒng)的重要組成部分,在糖尿病神經(jīng)痛等慢性疼痛狀態(tài)的形成過程中發(fā)揮著重要作用,通過改變脊髓背角神經(jīng)元遞質(zhì)釋放和受體活性,從而調(diào)節(jié)痛覺信息在脊髓背角的整合、傳遞。
　　 本試驗(yàn)通過腹腔注射鏈尿佐菌素(STZ),

2、制備糖尿病神經(jīng)痛大鼠模型,比較糖尿病神經(jīng)痛大鼠(DM)與正常大鼠(Control)間體重、空腹血糖和50％縮足反應(yīng)閾值(PWT)的變化;采用免疫組織化學(xué)染色方法,測(cè)定糖尿病神經(jīng)痛大鼠與正常大鼠脊髓背角NMDA受體的表達(dá)變化,從而探討NMDA受體在糖尿病神經(jīng)病理性痛形成中的作用。
　　 方法:健康SD雄性大鼠35只(130～150g),實(shí)驗(yàn)前測(cè)定所有大鼠的體重、空腹血糖和50％縮足反應(yīng)閾值(PWT)。隨機(jī)取26只大鼠腹腔注射STZ

3、(50mg/kg)制備實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。STZ注射一周后,21只大鼠測(cè)量空腹血糖＞16.7mol/L(成功率為80％),為糖尿病模型,其余5只大鼠空腹血糖＜16.7mol/L被剔除實(shí)驗(yàn)。21只糖尿病大鼠繼續(xù)觀察1周后(即STZ注射后2周),利用von Frey針測(cè)定大鼠的PWT,PWT小于4g為糖尿病神經(jīng)病理性痛大鼠,其中15只大鼠成功制備成糖尿病神經(jīng)痛大鼠模型(DM組,成功率約為58％)。另取9只正常大鼠腹腔注射相同體積的生理鹽水,用于STZ

4、注射后各時(shí)點(diǎn)的對(duì)照組(C組)。
　　 隨機(jī)取15只糖尿病神經(jīng)痛大鼠及9只正常大鼠進(jìn)行行為學(xué)和形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察。確定3個(gè)測(cè)量點(diǎn)及取材點(diǎn),分別為腹腔注射后3周、5周、7周;。根據(jù)時(shí)間點(diǎn)不同,將15只DM大鼠分為3組:DM3、DM5、DM7,每組5只;9只正常大鼠分為C3、C5、C7,每組3只。分別于注射后3周、5周、7周測(cè)量各組大鼠的體重、空腹血糖及50％縮足反應(yīng)閾值,然后取材。DM組所取材的實(shí)驗(yàn)大鼠需空腹血糖＞16.7mol/L,且

5、PWT＜4g。DM組各時(shí)間點(diǎn)取材實(shí)驗(yàn)大鼠5只及C組大鼠3只,多聚甲醛灌流固定后,取胸腰段膨大處脊髓進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,測(cè)定大鼠脊髓背角NMDA受體的免疫陽性神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)。
　　 所得數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X-±s)表示,采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行單因素方差分析、t檢驗(yàn),P＜0.05表示差異有顯著性。
　　 結(jié)果:
　　 1.在STZ注射后3周,DM組大鼠體重、50％縮足反應(yīng)閾值(PWT)較C組下降明顯(

6、P＜0.05),血糖明顯增高(P＜0.05),并且維持至STZ注射后的第7周,與同時(shí)點(diǎn)的對(duì)照組相比,體重、血糖、PWT值均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 2.大鼠脊髓背角NMDA受體的表達(dá)變化(見附表):與各時(shí)點(diǎn)C組正常對(duì)照組相比,DM組注射STZ后3周、5周、7周的糖尿病神經(jīng)痛大鼠脊髓背角NMDA受體免疫陽性神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)明顯增加(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:脊髓背角NMDA受體在脊髓水平參與了大鼠糖尿病神經(jīng)病性