NR2B在糖尿病神經痛大鼠脊髓背角表達的變化.pdf

1、目的:糖尿病神經病變是糖尿病最常見的慢性并發(fā)癥之一,其發(fā)病率逐年增高,感覺神經病變即糖尿病神經痛性病變是其中最為常見的,約占30％,其發(fā)病機制及病理生理機制十分復雜。脊髓背角的各種神經遞質和受體在糖尿病神經病理性痛等慢性疼痛時可發(fā)生一系列改變。NMDA受體是一種配體門控離子型谷氨酸受體,是興奮性氨基酸受體系統(tǒng)的重要組成部分。NMDA受體不僅參與學習記憶、突觸可塑性及神經發(fā)育等生理功能的調節(jié),而且,在疼痛、神經退行性變、癲癇等病理過程中發(fā)

2、揮重要作用。NMDA受體是由NR1和NR2亞單位組成的異五聚體。NR2B亞單位對NMDA受體的結構和功能起著十分重要的作用,通過多種方式調節(jié)NMDA受體的功能活性,其改變將影響機體NMDA受體系統(tǒng)的功能,進而影響痛覺信息在脊髓背角的整合、傳遞和調控。本實驗通過左下腹腔注射鏈尿佐菌素(STZ),制備糖尿病神經病理性疼痛大鼠模型。觀察比較糖尿病大鼠(DM)與正常大鼠(Control)在體重、空腹血糖和50％縮足反應閾值(PWT)等方面的變化

3、。采用免疫組織化學染色方法,比較糖尿病神經痛大鼠與正常大鼠脊髓背角NR2B的表達變化,從而探討NR2B在糖尿病神經病理性痛形成中的變化及作用,以期發(fā)現(xiàn)新一代治療慢性疼痛藥物的治療靶點。
　　 方法:
　　 健康雄性SD大鼠60只,體重130克～150克,實驗前測定所有大鼠的體重、空腹血糖和50％縮足反應閾值(PWT)。隨機取48只大鼠左下腹腔注射STZ(60mg/kg)制備糖尿病模型。STZ注射7天后,30只大鼠所測空腹

4、血糖＞16.7mol/L,為成功的糖尿病大鼠模型,其余18只大鼠空腹血糖＜16.7mol/L被剔除實驗,模型制備成功率為:63％。STZ注射14天后,用von Frey針測定大鼠的50％縮足反應閾值(PWT),PWT小于4g者為糖尿病神經痛大鼠模型。另外12只正常大鼠腹腔注射相同量的生理鹽水(C組),用作與注射STZ相對比的正常對照組。
　　 隨機取糖尿病神經痛大鼠20只(D組)和正常大鼠12只(C組)進行行為學及分子生物學實驗

5、。確定4個取材點,分別定為注射STZ后2周、3周、5周、7周。根據(jù)取材時間點不同,將20只D組大鼠分成4組(n=5):D2組、D3組、D5組、D7組;12只正常大鼠也分為4組(n=3):C2組、C3組、C5組、C7組。兩組分別于腹腔注射后2周、3周、5周、7周測量各大鼠的體重、空腹血糖及50％縮足反應閾值變化,然后取材。大鼠取材時,均用4％多聚甲醛灌流固定,取脊髓胸腰段膨大處置于4％多聚甲醛固定,蠟塊包埋,進行免疫組織化學染色,測定大鼠

6、脊髓背角NR2B的免疫陽性神經細胞數(shù)。所得數(shù)據(jù)以平均數(shù)士標準差(x-±s)表示,采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進行秩和檢驗、單因素方差分析、組內t檢驗和相關性分析,P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果:
　　 1：兩組大鼠在體重、空腹血糖、50％縮足反應閾值方面的變化比較(見附表):腹腔注射前,兩組大鼠在體重、空腹血糖及50％縮足反應閾值方面的無顯著性差異(P＞0.05)。兩組大鼠各對應時間點相比,D組大鼠體重

7、明顯較C組大鼠降低(p＜0.05),D組大鼠空腹血糖明顯較C組大鼠增高(0＜0.05),D組大鼠PWT明顯較C組大鼠降低(p＜0.05)。
　　 2：NR2B在大鼠脊髓背角的表達變化(見附表):與C組正常對照組相比,D組注射STZ后2周、3周、5周、7周的糖尿病神經痛大鼠脊髓背角NR2B免疫陽性神經元細胞數(shù)明顯增加(p＜0.05),在3周時NR2B免疫陽性.神經元細胞數(shù)量達到最多,5周時開始出現(xiàn)下降,在7周時明顯下降。