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1、本文分四部分論述了大鼠脊髓NMDA受體NR2B參與炎性痛的機(jī)理研究。 第一部分:大鼠周圍組織炎性痛模型的建立及對(duì)脊髓背角神經(jīng)元可塑性改變。 目的:建立大鼠周圍組織炎性動(dòng)物模型并研究周圍組織炎癥引起脊髓后角表層神經(jīng)元的可塑性改變。 方法:取大鼠24只,隨機(jī)分為三組:正常組、生理鹽水組和模型組,每組8只。正常組大鼠在右腳掌部進(jìn)行皮下穿刺,不注射任何藥物,生理鹽水組在右腳掌部皮下穿刺并注射生理鹽水100μL,模型組在相
2、應(yīng)部位注射配制好的l00μ12mgCarrageenan。于致炎后3h、15h觀察各只大鼠VonFrey纖維機(jī)械痛閾值,輻射熱刺激儀測(cè)得潛伏期;記錄痛閾值后,分別灌注大鼠,取腳掌部皮膚、脊髓腰膨大固定,分別做HE染色和NMDA受體NR2B、nNOS、COX一2免疫組化染色,觀察陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目。 結(jié)果:由模型組可以看出,致炎側(cè)大鼠腳掌在兩個(gè)時(shí)相對(duì)輻射熱和機(jī)械痛痛閾值都明顯降低(P<0.05);HE染色表明:在模型組皮下組織中大量的炎
3、癥細(xì)胞浸潤(rùn),局部組織結(jié)構(gòu)遭到破壞:在模型組大鼠的脊髓后角表層NMDA受體NR2B、nNOS、COX一2免疫組化染色的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目較其它兩組均明顯增加(P<0.05)。 結(jié)論:腳掌部位注射Carrageenan可以引起腳掌部位皮膚機(jī)械痛閾值下降,熱輻射潛伏期降低;這種功能性改變的基礎(chǔ)是在脊髓背角部位NMDA受體NR2B、nNOS、COX一2蛋白表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的增加。 第二部分:大鼠脊髓蛛網(wǎng)膜下腔辣椒素對(duì)炎癥痛的影響。
4、 目的:研究大鼠脊髓蛛網(wǎng)膜下腔注射辣椒素對(duì)周圍組織致炎大鼠疼痛的影響。 方法:分別對(duì)大鼠鞘內(nèi)置管,一星期后保留沒有功能障礙大鼠24只,分為正常組、溶媒組、辣椒素組,每組8只;正常組大鼠鞘內(nèi)注射生理鹽水,溶媒組注入溶媒,辣椒素組注入0.25%辣椒素,容積均為20μL。分別于置管前、置管后、注藥后第4、7天觀察VonFrey值和輻射熱潛伏期變化;用藥一周后,右腳掌注入l00μl2mgCarrageenan,于致炎后早期時(shí)相、晚期時(shí)
5、相觀察VonFrey值和輻射熱潛伏期變化。取各組大鼠脊髓腰膨大,并做NMDA受體NR2B、nNOS、COX一2蛋白免疫組化染色,計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞。 結(jié)果:正常組和溶媒組大鼠的機(jī)械痛閾值和熱輻射潛伏期和注藥前相比沒有顯著性差異(p>0.05)。但使用辣椒素后第四天、第七天,和溶媒組、正常組相比,辣椒素組大鼠右腳痛閾值明顯升高。致炎后,致炎右腳晚期時(shí)相痛閾值高于早期時(shí)相:和置管前痛閾值相比也有明顯升高。免疫組化結(jié)果顯示:使用了辣椒素組大
6、鼠,NMDA受體NR2B,nNOS,COX一2蛋白的陽(yáng)性細(xì)胞明顯減少(P<0.05)。 結(jié)論:鞘內(nèi)大量使用辣椒素可以在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)提高大鼠痛閾值,對(duì)炎癥刺激所引發(fā)脊髓部位相關(guān)功能蛋白的表達(dá)具有抑制作用。 第三部分:大鼠脊髓蛛網(wǎng)膜下腔Ifenprodn對(duì)炎癥痛的影響。 目的:研究NMDA受體NR2B亞型特異性拮抗劑(Ifenprodil)對(duì)大鼠炎癥兩個(gè)時(shí)相痛閾的影響。 方法:分別對(duì)大鼠進(jìn)行鞘內(nèi)置管,1周后,取無(wú)
7、活動(dòng)和感覺障礙大鼠隨機(jī)分為4組,為正常對(duì)照組、模型組、氯胺酮組、Ifenprodil組。正常對(duì)照組大鼠右側(cè)后腳掌注入生理鹽水l00μL,其它各組分別右側(cè)后腳掌注入相同容量l00μL2mgCarrageenan致炎;各組在致炎后3h,蛛網(wǎng)膜下腔注藥20μL,對(duì)照組和模型組大鼠分別注入生理鹽水,氯胺酮組注氯胺酮100μg;Ifenprodil組注Ifenprodil10μg。致炎后3、15h觀察其機(jī)械痛閾值和熱輻射潛伏期。取各組大鼠脊髓腰膨
8、大,并做NMDA受體NR2B,nNOS,COX一2蛋白免疫組化染色,計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞。 結(jié)果:由模型組可以看出,兩個(gè)時(shí)相上痛閾值明顯降低,氯胺酮在早期時(shí)相,鎮(zhèn)痛作用較弱,而在第二時(shí)相上,鎮(zhèn)痛作用較強(qiáng)(P 9、一2蛋白表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少(P<0.05)。 結(jié)論:氯胺酮、Ifenprodil都有鎮(zhèn)痛作用,但是其起效時(shí)間及作用機(jī)制可能不同。對(duì)炎癥性疼痛,蛛網(wǎng)膜下腔用Ifcnprodil可以有比氯胺酮更好的鎮(zhèn)痛效果。 第四部分:大鼠脊髓蛛網(wǎng)膜下腔Ifenprodil對(duì)丘腦束旁核興奮性神經(jīng)元放電的影響。 目的:研究鞘內(nèi)應(yīng)用Ifenprodil對(duì)丘腦束旁核興奮性神經(jīng)元放電的影響。 方法:分別對(duì)大鼠鞘內(nèi)置管,1周后保 10、留沒有功能障礙的大鼠,分離坐骨神經(jīng),做氣管切開,采用控制呼吸。確定放電穩(wěn)定的Pf(Parafascleularis)可興奮性神經(jīng)元,記錄正常神經(jīng)元放電情況;對(duì)穩(wěn)定放電神經(jīng)元的大鼠分別鞘內(nèi)注入生理鹽水、氯胺酮(5mg/m1)和Ifenprodil(0.5mg/rrd);觀察Pf可興奮性神經(jīng)元放電改變的情況。 結(jié)果:刺激坐骨神經(jīng),Pf可興奮性神經(jīng)元放電頻率增加;刺激前后1s內(nèi)放電頻率有顯著性差異(P<0.05)。氯胺酮組和Ifenp
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