丁基苯酞對慢性腦缺血老齡大鼠海馬中突觸素及NMDA受體亞單位NR2B表達(dá)的影響.pdf

1、隨著我國進(jìn)入老齡化社會，腦血管疾病已是一種主要的致死、致殘的常見病，它與心臟病、惡性腫瘤共同構(gòu)成人類的三大主要致死病因。特別是象腦血管性癡呆、阿爾茨海默病、皮質(zhì)下動脈硬化性腦病等由慢性腦缺血導(dǎo)致的腦血管病，癥狀較為隱襲，病情逐漸進(jìn)展。因此，對慢性腦缺血進(jìn)行研究，找出有效的治療和預(yù)防措施是非常有意義的。 慢性腦缺血是指腦部因慢性的血供不足，而導(dǎo)致腦代謝障礙和功能衰退，可引起眩暈、耳鳴、智力減退、記憶力下降或注意力不集中、定向力障礙

2、等多組疾病。多數(shù)學(xué)者研究中發(fā)現(xiàn)在對大鼠進(jìn)行合理分組的基礎(chǔ)上對其海馬CA1區(qū)和齒狀回分子層行突觸素免疫活性定量分析，結(jié)果顯示同為老年大鼠，記憶損害的較記憶正常的大鼠海馬結(jié)構(gòu)突觸素免疫組織化學(xué)染色灰度值顯著降低，且老年大鼠平均逃避潛伏期與其海馬、齒狀回突觸素免疫組織化學(xué)染色灰度值呈負(fù)相關(guān)。這些結(jié)果都強(qiáng)烈提示：老年學(xué)習(xí)記憶減退與海馬結(jié)構(gòu)突觸素的變化密切相關(guān)。血管性癡呆(Vascular Dementia,VD)小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元N-甲基-

3、D-天門冬氨酸(N-Methyl-D-Asparate，NMDA)受體2B亞單位(NR2B)mRNA表達(dá)減少，與其學(xué)習(xí)和記憶成績降低相一致。因此推測NR2BmRNA的表達(dá)減少可能參與了VD發(fā)病的分子生物學(xué)機(jī)制。VD小鼠海馬組織CA1區(qū)NR2B的mRNA表達(dá)減低的機(jī)制，可能與海馬缺血、缺氧致神經(jīng)元死亡或結(jié)構(gòu)受損有關(guān)，也可能與神經(jīng)元長期低代謝影響神經(jīng)傳遞有關(guān)。 丁基苯酞(dl-butylphthalide)化學(xué)名稱為消旋-3-正丁基

4、苯酞，商品名恩必普(NBP)，與芹菜籽中提取的左旋芹菜甲素的結(jié)構(gòu)相同，為其人工合成的消旋體。臨床研究結(jié)果表明，丁基苯酞對急性缺血性腦卒中患者的中樞神經(jīng)功能的損傷有改善作用，可促進(jìn)患者功能恢復(fù)。它可能通過降低花生四烯酸含量，提高腦血管內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮和前列腺素L2的水平，抑制谷氨酸釋放，降低腦細(xì)胞內(nèi)鈣濃度，抑制自由基和提高抗氧化酶活性等機(jī)制而產(chǎn)生上述藥效作用。本文旨在觀察丁基苯酞對慢性腦缺血老齡大鼠海馬中突觸素及NR2B表達(dá)的影響。

5、 材料方法1．實驗動物與分組健康Wistar大鼠80只，雌雄不拘，12-14月齡，體重450-550克。隨機(jī)分為4組，每組20只，A組：對照組(假手術(shù)+溶劑)；B組：單純?nèi)毖M(手術(shù)+溶劑)；C組：缺血低劑量治療組(手術(shù)+低劑量丁基苯酞+溶劑)；D組：缺血高劑量治療組(手術(shù)+高劑量丁基苯酞+溶劑)；C組和D組于造模2個月后分別按60mg/kg、120mh/kg給予丁基苯酞每日灌喂，丁基苯酞用花生油稀釋至2ml。A組和B組于造模2個月后

6、每日給于花生油2ml灌喂，各組皆連續(xù)灌喂1個月。 2．模型制作 鈍性分離單純?nèi)毖M和缺血高、低劑量治療組大鼠雙側(cè)頸總動脈，用0號手術(shù)線分別結(jié)扎其近心端及遠(yuǎn)心端；分離對照組雙側(cè)頸總動脈但不結(jié)扎。術(shù)后各組大鼠均在常規(guī)條件下飼養(yǎng)。 3．標(biāo)本制作 手術(shù)3個月后，將大鼠經(jīng)心臟灌注后，斷頭取左腦，用4％的多聚甲醛固定后做石蠟切片，供HE染色和免疫組化染色使用。 4．觀察指標(biāo) 4．1采用HE染色觀察大鼠

7、海馬神經(jīng)元細(xì)胞的變化4．2免疫組化觀察突觸素和NMDA受體亞單位NR2B表達(dá)的變化5．統(tǒng)計方法所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，多組間比較采用單因素方差分析，用LSD法進(jìn)行兩兩比較，取α=0.05作為顯著性檢驗標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果1．實驗動物一般情況術(shù)后各組大鼠均出現(xiàn)精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，進(jìn)食減少。術(shù)后1天，A組大鼠精神恢復(fù)；B、C、D組大鼠改善不明顯。3-5天B、C、D組大鼠逐漸恢復(fù)，1

8、周時反應(yīng)、進(jìn)食正常。 2．HE染色 觀察海馬神經(jīng)元細(xì)胞，A組：變性、死亡不明顯，神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目多，排列緊密而整齊，細(xì)胞界限清晰B組：大量變性、死亡，神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目減少、排列紊亂，胞間距離增大。C組：神經(jīng)元變性、死亡較B組減輕，正常神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目較B組多。D組：神經(jīng)元變性、死亡和神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目減少較C組為輕。 3．突觸素免疫組化染色各組均取海馬的CA1區(qū)、CA3區(qū)和齒狀回三處進(jìn)行觀察并統(tǒng)計突觸素灰度值，CA1區(qū)：A組：1

9、56.38±3.69；B組：125.62±11.52；C組：142.77±3.95；D組150.01±4.98；CA3區(qū)：A組：154.10±4.27；B組：120.47±6.49；C組：140.16±5.07；D組：146.47±4.86；齒狀回區(qū)(Dentate Gyrus，DG):A組：140.00±4.59；B組：111.55±5.33：C組：128.05±4.48；D組：134.22+4.19。B組與A組相比，突觸素的表達(dá)明顯

10、下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；C組、D組與B組相比突觸素的表達(dá)增高明顯，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；D組與C組相比突觸素的表達(dá)增高，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 4．NMDA受體亞單位NR2B免疫組化染色各組均取海馬的CA1區(qū)、CA3區(qū)和齒狀回三處進(jìn)行觀察并統(tǒng)計NMDA受體亞單位NR2B灰度值，CA1區(qū)：A組：169.54±3.36；B組：135.00±6.48；C組：155.97±3.97：D組1

11、61.07±5.29；CA3區(qū)：A組：163.07±3.57；B組：130.28±7.81；C組：150.55±4.67；D組：155.00±5.15；齒狀回區(qū)：A組：151.62±4.34；B組：121.50±4.85：C組：137.93±4.17；D組：144.08±3.71。B組與A組相比，NR2B的表達(dá)明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；C組、D組與B組相比NR2B的表達(dá)增高明顯，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；D