丁基苯酞對(duì)慢性腦缺血老齡大鼠海馬區(qū)Chat的影響.pdf

1、目的與背景 慢性腦缺血是血管性癡呆(vascular dementia，VD)和阿爾茨海默病(Alzheimer′s disease，AD)發(fā)病的重要基礎(chǔ)。近來(lái)研究證明，AD和VD均存在明顯的血管因素，而腦血流低灌注在癡呆的發(fā)病進(jìn)程中的作用日益引起重視，因此研究其發(fā)病機(jī)制對(duì)慢性腦缺血相關(guān)性疾病的臨床防治具有普遍意義。 慢性腦缺血所致的神經(jīng)損傷主要表現(xiàn)為學(xué)習(xí)和記憶等認(rèn)知功能損害。海馬缺血性損傷是其主要的病理基礎(chǔ)。慢性腦缺血

2、導(dǎo)致海馬功能改變包含兩個(gè)主要方面的作用：神經(jīng)細(xì)胞的損傷和延遲性膽堿能功能的缺損。中樞膽堿能神經(jīng)有促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶、激活腦電、維持覺(jué)醒、參與精神意志活動(dòng)等重要生理功能。膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(choline acetyltransferase，Chat)常作為研究膽堿能神經(jīng)元的特殊標(biāo)志。丁基苯酞(dl-n-butylphthalide,NBP)是治療腦缺血的一種新藥。有研究表明NBP可改善小鼠全腦缺血腦能量代謝，增加局部腦缺血大鼠缺血區(qū)的腦血流，改善

3、大腦中動(dòng)脈結(jié)扎(middle cerebral artery occlusion，MCAO)大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙。本文通過(guò)免疫組化、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Reverse Transcriptase Polymerse Chain Rection，RT-PCR)、斑點(diǎn)免疫結(jié)合實(shí)驗(yàn)三種方法觀察大鼠海馬區(qū)Chat的變化，旨在探討NBP對(duì)慢性缺血引起的認(rèn)知功能障礙的影響及其作用機(jī)制。 材料方法 1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組健康Wistar大鼠

4、150只，隨機(jī)分為5組，每組30只，A組：對(duì)照組(假手術(shù)+溶劑)；B組：?jiǎn)渭內(nèi)毖M(手術(shù)+溶劑)；C組：缺血低劑量治療組(手術(shù)+低劑量NBP+溶劑)；D組：缺血高劑量治療組(手術(shù)+高劑量NBP+溶劑)；E組：預(yù)防組(中等劑量NBP+溶劑+手術(shù))。 2．模型的制作鈍性分離單純?nèi)毖M和缺血高、低劑量治療組大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈，用O號(hào)手術(shù)線分別結(jié)扎其近心端及遠(yuǎn)心端；分離對(duì)照組雙側(cè)頸總動(dòng)脈但不結(jié)扎。 3．標(biāo)本的制作手術(shù)3月后，所有大鼠經(jīng)心臟

5、灌注后，斷頭取腦，部分用4％的多聚甲醛固定后做石蠟切片，供做免疫組化用；部分放入超低溫冰箱，以備RT-PCR及免疫斑點(diǎn)表達(dá)。 4．實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法應(yīng)用免疫組化、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、斑點(diǎn)免疫結(jié)合實(shí)驗(yàn)等技術(shù)。 5．統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件(SPSS Inc)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。符合正態(tài)分布且方差齊，不同組之間的計(jì)量資料的比較應(yīng)用單因素方差分析，否則用非參數(shù)檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。 結(jié)果 1．實(shí)

6、驗(yàn)動(dòng)物一般情況術(shù)后大鼠均出現(xiàn)精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，進(jìn)食減少。術(shù)后1天，A組精神恢復(fù)；B、C、D、E組改善不明顯。3-5天B、C、D、E組逐漸恢復(fù)，1周后反應(yīng)、進(jìn)食正常。 2．Chat免疫組化染色各組海馬區(qū)Chat陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目進(jìn)行觀察并統(tǒng)計(jì)：B組與A組相比，Chat的表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；C組、D組、E組與B組相比Chat的表達(dá)明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；D組與C組、E組相比Chat表達(dá)增

7、加，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。E組與C組差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 3．ChatmRNART-PCR的結(jié)果各組海馬區(qū)ChatmRNA光密度值與ActinmRNAY匕密度值的比值進(jìn)行觀察并統(tǒng)計(jì)：B組與A組相比，Chat的表達(dá)明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)； C組、D組、E組與B組相比Chat的表達(dá)明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；D組與C組、E組相比Chat表達(dá)增加，且差異具

8、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；E組與C組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 4．Chat斑點(diǎn)免疫結(jié)合實(shí)驗(yàn)的結(jié)果各組海馬區(qū)Chat免疫斑點(diǎn)的灰度值進(jìn)行觀察并統(tǒng)計(jì)：B組與A組相比，Chat的表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；C組、D組、E組與B組相比Chat的表達(dá)明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；D組與C組、E組相比Chat表達(dá)增加，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。E組與C組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。