丁基苯酞對(duì)1型糖尿病肝損傷大鼠Nrf2-ARE信號(hào)通路的影響.pdf

1、糖尿病肝損傷是指糖尿病引起的肝臟組織學(xué)和功能學(xué)的異常改變，屬于糖尿病的慢性并發(fā)癥，多發(fā)于2型糖尿病(T2DM)。糖尿病肝損傷常有以下病理學(xué)表現(xiàn):(1)肝糖原累積;(2)脂肪肝:肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)脂滴，多為輕度脂肪變性;(3)肝硬化:糖尿病并發(fā)肝硬變發(fā)生率較低，早期肝損傷甚至輕度脂肪變性時(shí)即可見(jiàn)膠原纖維增生;(4)非特異性細(xì)胞變性如肝細(xì)胞嗜酸性變等;(5)微血管病變、脂肪肉芽腫等改變。
　　近年來(lái)隨著對(duì)糖尿病并發(fā)癥研究的不斷深入，其發(fā)病機(jī)

2、制有包括:多元醇通路活性增高、晚期糖基化終末產(chǎn)物生成增多、蛋白激酶C激活、己糖胺通路活性增高。Brownlee教授等學(xué)者認(rèn)為，糖尿病并發(fā)癥的中心機(jī)制為“氧化應(yīng)激”，即高糖引起活性氧生成過(guò)多最終導(dǎo)致糖尿病微血管損傷。作為機(jī)體最重要的抗氧化通路，Nrf2-ARE信號(hào)通路調(diào)控編碼抗氧化蛋白，并可抑制脂質(zhì)沉積，增強(qiáng)肝細(xì)胞解毒和抗氧化能力。當(dāng)機(jī)體暴露于活性氧族(ROS)時(shí)，Nrf2與ARE結(jié)合，調(diào)控下游抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶（如過(guò)氧化氫酶、硫氧還蛋

3、白還原酶、血紅素氧合酶-1等）的表達(dá)從而抵御氧化應(yīng)激。而此通路在糖尿病肝損傷機(jī)制的研究未見(jiàn)報(bào)道。
　　丁基苯酞（恩必普）為我國(guó)臨床常用治療腦血管類(lèi)疾病的藥物，可有效改善腦組織缺血再灌注引起的氧化應(yīng)激，具有抑制谷氨酸釋放，降低細(xì)胞內(nèi)鈣濃度，抑制自由基和提高抗氧化酶活性等作用。但其應(yīng)用于糖尿病肝損傷方面研究國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)應(yīng)用丁基苯酞對(duì)糖尿病肝損傷模型大鼠進(jìn)行干預(yù)，觀察氧化應(yīng)激水平及Nrf2通路變化，探討

4、氧化應(yīng)激在糖尿病肝損傷中的作用以及丁基苯酞可能的治療機(jī)制。
　　方法:60只健康雄性SD大鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組(Control)、糖尿病模型組(DM)、丁基苯酞組(NBP)。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，除對(duì)照組外，余大鼠組腹腔注射1％STZ（60mg/kg），對(duì)照組腹腔注射相當(dāng)劑量枸櫞酸緩沖液，72h后連續(xù)3次尾靜脈取血測(cè)血糖，以≥16.7 mmol/L為DM造模成功標(biāo)準(zhǔn)。造模成功后，正常組給予相當(dāng)劑量的飲用水灌胃，模型組給予相當(dāng)劑量的玉米油

5、灌胃，丁基苯酞組按80mg/kg灌胃，總共12周。于后12周末，禁食12h，麻醉狀態(tài)下稱重，股動(dòng)脈取血，分離血清，測(cè)定ALT、AST、GLU、TG、TC、HDL、LDL、MDA、T-SOD;摘取肝臟，留取部分組織置于4％多聚甲醛固定液，PAS染色觀察大鼠肝臟糖原分布，F(xiàn)n免疫組化半定量細(xì)胞外基質(zhì)水平;留取肝組織置于PBS中漂洗后液氮速凍，-80℃低溫冰箱長(zhǎng)期保存，用于檢測(cè)肝組織MDA含量、T-SOD活力，Western Blot法檢測(cè)肝

6、臟Nrf2、HO-1、Catalase的表達(dá)及分布情況。
　　結(jié)果:
　　1、實(shí)驗(yàn)大鼠的一般狀況
　　實(shí)驗(yàn)過(guò)程中除對(duì)照組外，其余兩組均有死亡情況，其中模型組死亡10只，丁基苯酞組死亡8只，死亡原因可能與長(zhǎng)期高血糖引起的酮癥酸中毒及各臟器功能紊亂衰竭有關(guān)，丁基苯酞組不排除個(gè)別大鼠因?qū)λ幬锂a(chǎn)生的毒性不耐受而死亡。對(duì)照組大鼠體重呈進(jìn)行性增長(zhǎng)，反應(yīng)靈敏，毛色有光澤，糞便呈麥粒樣，尿量、飲水量正常，飲食正常。其余各組大鼠腹腔注射

7、STZ后，多尿多飲多食癥狀明顯，并逐漸表現(xiàn)出體重減輕，精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，毛色暗淡無(wú)光澤，便溏。
　　2、各組大鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)改變
　　PAS糖原染色可見(jiàn)正常組大鼠肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)散在紫紅色糖原顆粒，分布較均勻，界限清楚，染色深。模型組大鼠糖原顆粒含量明顯減少，分布稀疏、不均勻。丁基苯酞組大鼠糖原含量明顯增多且分布均勻。
　　3、各組大鼠血清ALT、AST、GLU、TC、TG、LDL、HDL含量
　　各組大鼠血清A

8、LT、AST、GLU、TC、TG、LDL含量結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比，模型組、丁基苯酞組大鼠血清明顯升高(P＜0.05);與模型組相比，丁基苯酞組大鼠血清以上指標(biāo)明顯降低(P＜0.05)。
　　各組大鼠血清HDL含量結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比，模型組、丁基苯酞組大鼠血清HDL明顯降低(P＜0.05);與模型組相比，丁基苯酞組大鼠血清HDL明顯升高(P＜0.05)。
　　4、各組大鼠血清及肝臟組織MDA含量及T-SOD活力
　

9、　各組大鼠血清及肝組織MDA含量結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比，模型組、丁基苯酞組大鼠明顯升高(P＜0.05);與模型組相比，丁基苯酞組大鼠明顯降低（P＜0.05）。
　　各組大鼠血清及肝組織T-SOD含量結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比，模型組、丁基苯酞組大鼠明顯升高(P＜0.05);與模型組相比，丁基苯酞組大鼠明顯升高(P＜0.05)。
　　5、各組大鼠肝組織Nrf2、HO-1、Catalase、Fn的表達(dá)水平
　?、倜庖呓M化示:N

10、rf2蛋白陽(yáng)性表達(dá)于肝細(xì)胞核中，同對(duì)照組相比，糖尿病組Nrf2在胞核內(nèi)表達(dá)明顯增強(qiáng)，丁基苯酞組尤為突出(P＜0.05); HO-1、Catalase作為Nrf2下游的兩個(gè)抗氧化蛋白，在三組動(dòng)物肝細(xì)胞胞質(zhì)中均有表達(dá)，而丁基苯酞組表達(dá)較高(P＜0.05）。對(duì)照組Fn于中央靜脈及匯管區(qū)少有分布，同期模型組表達(dá)較高，丁基苯酞組Fn表達(dá)明顯減少(P＜0.05）。
　?、赪estem Blot提示:各組大鼠肝組織Nrf2水平結(jié)果顯示，同對(duì)照組

11、相比，模型組和丁基苯酞組肝臟細(xì)胞核表達(dá)較高(P＜0.05);同模型組相比，丁基苯酞組明顯升高(P＜0.05)。
　　各組大鼠肝組織HO-1、Catalase水平結(jié)果顯示，同對(duì)照組相比，模型組和丁基苯酞組肝臟細(xì)胞核表達(dá)較高(P＜0.05);同模型組相比，丁基苯酞組明顯升高(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、1型糖尿病肝損傷大鼠存在糖脂代謝紊亂及肝功能異常。
　　2、氧化應(yīng)激參與糖尿病肝損傷的發(fā)病機(jī)制。