Nrf2-ARE通路在染氟雄性大鼠生殖損傷中的作用及NAC的影響.pdf

1、目的:
　　本課題通過建立氟染毒大鼠模型，以氟化鈉（NaF）為染毒劑，以N-乙酰半胱氨酸（NAC）為干預因素，以Nrf2/ARE[核轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2( Nrf2)/抗氧化反應元件( ARE)]信號通路為靶點，探討氟染毒對大鼠睪丸所致的氧化應激和DNA損傷，評估Nrf2/ARE信號通路在氟化物的生殖毒性中所起作用及NAC的生殖保護作用，為氟染毒致雄性生殖損傷的中毒機制及防治措施提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　

2、1．動物分組和處理
　　60只4周齡SPF(Specific pathogen free)級SD雄性大鼠，體重100~150g。將大鼠隨機分為生理鹽水組、NaF組、NAC組、NAC+NaF組，對應的受試物及劑量為：0.90％氯化鈉溶液（10ml/kg）、25mg/kg/dNaF、150mg/kg/dNAC和25mg/kg/d NaF+150mg/kg/dNAC，處理時間為7周。
　　2.生殖相關(guān)指標的檢測
　　計算睪丸

3、和附睪臟器系數(shù)，采用計算機輔助精子質(zhì)量分析系統(tǒng)檢測大鼠精子密度、活動率和畸形率，ELISA法檢測血清睪酮含量，采用HE(Hematoxylin and eosin)染色法觀察生精小管形態(tài)，用氟離子選擇電極測定睪丸氟含量。
　　3.氧化和DNA損傷相關(guān)指標的檢測
　　用硫代巴比妥酸比色法測定丙二醛（MDA）含量，鉬酸銨比色法測定過氧化氫酶（CAT）活力，黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶（SOD）活力。ELISA法檢測血清和睪丸

4、8-羥基脫氧鳥苷酸（8-OHdG）含量，免疫組織化學法測定睪丸中8-OHdG的表達情況。
　　4. Nrf2/ARE通路相關(guān)分子的檢測
　　熒光定量PCR法和免疫印跡法分別測定睪丸Nrf2及下游因子血紅素氧合酶（HO-1）和醌氧化還原酶（NQO1）的mRNA及蛋白表達量。
　　結(jié)果:
　　1.雄性生殖功能指標分析結(jié)果
　　與對照組相比，NaF組的大鼠睪丸氟含量明顯升高，體重、睪丸和附睪濕重、精子質(zhì)量和數(shù)量、

5、睪酮含量顯著降低，睪丸和附睪臟器系數(shù)無明顯變化，曲細精管結(jié)構(gòu)形態(tài)明顯紊亂。與NaF組相比，NAC預處理組的大鼠睪丸氟含量沒有明顯降低，體重、睪丸和附睪濕重、精子質(zhì)量和數(shù)量及睪酮含量沒有明顯升高，曲細精管壁形態(tài)結(jié)構(gòu)明顯改善。
　　2．氧化和DNA損傷分析結(jié)果
　　與對照組相比，NaF組的大鼠血清MDA含量、血清和睪丸8-OHdG水平及睪丸8-OHdG免疫染色強度明顯升高，且免疫反應陽性物質(zhì)主要分布在胞質(zhì)，表現(xiàn)為彌散性的胞質(zhì)棕黃

6、色或棕色顆粒物，血清SOD和CAT活力顯著降低。與NaF組相比，NAC預處理組的大鼠血清MDA含量、8-OHDG水平和8-OHdG免疫染色強度明顯降低，血清SOD和CAT活力沒有明顯升高，但有改善趨勢。
　　3．Nrf2/ARE通路的表達結(jié)果
　　與對照組相比，NaF組和NAC組的大鼠睪丸Nrf2、HO-1和NQO1的mRNA表達均明顯升高；與NaF組相比，NAC預處理組的大鼠睪丸Nrf2的mRNA表達明顯降低、HO-1和N

7、QO1的mRNA表達無明顯降低。與對照組相比，NaF組和NAC組的大鼠睪丸胞核Nrf2與胞質(zhì)HO-1和NQO1蛋白表達量均明顯升高，而胞質(zhì)Nrf2蛋白表達量無明顯差異；與NaF組相比，NAC預處理組的大鼠睪丸胞核和胞質(zhì)Nrf2及HO-1蛋白表達量均明顯降低，而NQO1蛋白表達量無明顯差異。
　　結(jié)論:
　　氟化物暴露可通過誘導氧化應激而引起雄性生殖DNA損傷，同時能激活Nrf2/ARE信號通路。NAC預處理可一定程度上促進N