內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激IRE1通路在氟致雄性大鼠生殖損傷中的作用.pdf

1、目的：
　　本研究通過建立氟染毒大鼠模型，探討氟暴露致生殖損傷的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激效應(yīng)，評估氟對生殖系統(tǒng)的影響及氟化鈉和N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine，NAC）的聯(lián)合作用對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的效果，為氟致雄性生殖損傷的毒作用機制及防治措施提供新的思路。
　　方法：
　　1．動物分組和處理
　　60只4周齡SPF級的SD雄性大鼠，體重為100~140g，隨機分為4組，分別為生理鹽水對照組、NAC組、NaF組和N

2、AC+NaF組，每組15只。對應(yīng)各組給予的溶液及劑量為：0.9％氯化鈉溶液、150mg/kg/d NAC溶液、25mg/kg/d NaF溶液、先灌胃150mg/kg/d NAC溶液，半小時后再灌胃25mg/kg/d NaF溶液，均以經(jīng)口灌胃方式染毒，每周連續(xù)灌胃6天，停灌1天，時間為7周。
　　2.生殖損傷效應(yīng)相關(guān)指標(biāo)的檢測
　　稱量睪丸和附睪重量，計算其對應(yīng)的臟器系數(shù)，并用氟離子選擇電極測定睪丸組織氟含量，ELISA法檢測

3、血清睪酮、卵泡刺激素和促黃體生成素含量，TUNEL法檢測大鼠睪丸細(xì)胞凋亡情況。
　　3.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)的檢測
　　q-PCR法測定各組大鼠睪丸中IRE1及下游因子XBP1和JNK的mRNA表達(dá)水平。Western Blot法檢測各組大鼠睪丸中GRP78、IRE1、p-IRE1、XBP1u、XBP1s、JNK和p-JNK蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.雄性生殖功能效應(yīng)指標(biāo)結(jié)果
　　與對照組相比，NaF

4、組和NAC+NaF組睪丸氟含量都明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），NaF組大鼠體重、睪丸和附睪濕重均下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但各組睪丸和附睪臟器系數(shù)間無差異；ELISA檢測血清生殖激素水平，結(jié)果顯示，與對照組相比，NaF組和NAC+NaF組血清睪酮含量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），NaF組和NAC+NaF組血清卵泡刺激素和促黃體生成素含量升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），NAC+NaF組與NaF

5、組相比，血清卵泡刺激素和促黃體生成素含量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。2×2析因方差分析結(jié)果顯示，NaF和NAC的交互作用對FSH和LH含量的影響，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　2．細(xì)胞凋亡分析結(jié)果
　　TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，NaF組和NAC+NaF組睪丸組織細(xì)胞凋亡指數(shù)升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P<0.01），與NaF組相比， NAC+NaF組細(xì)胞凋亡指數(shù)下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義

6、（P<0.01）。
　　3．內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子基因蛋白表達(dá)結(jié)果
　　q-PCR檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子mRNA的表達(dá)水平，與對照組相比，氟暴露明顯上調(diào)了大鼠睪丸IRE1、XBP1和JNK的mRNA表達(dá)量，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），與NaF組相比，NAC聯(lián)合NaF作用處理降低IRE1、XBP1和JNK的mRNA表達(dá)量，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。析因方差分析結(jié)果顯示，NaF和NAC的交互作用對IRE1、XBP1和J

7、NK的mRNA表達(dá)量的影響，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Western Blot檢測相關(guān)蛋白表達(dá)水平結(jié)果顯示，與對照組相比，NaF組的GRP78、XBP1s和p-JNK蛋白表達(dá)均明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），另外，NaF組及NAC+NaF組的p-IRE1蛋白表達(dá)均明顯上調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與NaF組相比，NAC聯(lián)合作用后明顯抑制了GRP78、XBP1s和p-JNK蛋白表達(dá)水平的上調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義