絲膠對(duì)糖尿病大鼠腎臟ERK信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的:
　　以鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)致2型糖尿病大鼠模型為研究對(duì)象,采用免疫組織化學(xué)染色、WesternBlotting、RT-PCR等方法,觀察糖尿病大鼠腎臟胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellularsignalregulatedkinase,ERK)信號(hào)通路的變化,深入探討糖尿病腎病(diabeticnephropathy,DN)的發(fā)病機(jī)制和絲膠的保護(hù)作用。
　　方法:
　　清潔級(jí)雄性

2、SD大鼠48只,隨機(jī)分為4組:正常對(duì)照組、糖尿病模型組、絲膠治療組和陽(yáng)性對(duì)照組,每組12只大鼠。正常對(duì)照組大鼠不做任何處理;糖尿病模型組、絲膠治療組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠均采用2％STZ(25mg/kg/d,連續(xù)3d)腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型,以血糖(bloodglucose,BG)≥16.7mmol/L作為成模標(biāo)準(zhǔn)。待模型成功建立后,糖尿病模型組大鼠不再作任何處理;絲膠治療組大鼠給予絲膠(2.4g/kg/d)灌胃35天;陽(yáng)性對(duì)照組大鼠

3、給予二甲雙胍(55.33mg/kg/d)灌胃,時(shí)間同絲膠治療組。
　　分別檢測(cè)各組大鼠的BG、24小時(shí)尿蛋白定量、血肌酐和尿素氮含量;分別采用免疫組織化學(xué)染色法、WesternBlotting和RT-PCR法檢測(cè)各組大鼠腎臟絲裂原活化蛋白激酶的激酶1/2(mitogen-activatedproteinkinasekinase1/2,MEK1/2)、磷酸化ERK1/2(pERK1/2)、原癌基因c-fos蛋白和mRNA的表達(dá)。

4、r>　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠的BG:與正常對(duì)照組大鼠相比,糖尿病模型組大鼠的BG明顯升高(P<0.01)。絲膠治療組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠的BG明顯低于糖尿病模型組(P<0.01),且絲膠治療組與陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)明顯差別(P>0.05)。
　　2.各組大鼠的24h尿蛋白定量:與正常對(duì)照組大鼠相比,糖尿病模型組大鼠的24h尿蛋白定量明顯升高(P<0.01)。絲膠治療組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠的24h尿蛋白定量明顯低于糖尿病模型組(P<0

5、.01),且絲膠治療組與陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)明顯差別(P>0.05)。
　　3.各組大鼠的血肌酐和尿素氮含量:糖尿病模型組大鼠的血肌酐和尿素氮含量明顯高于正常對(duì)照組大鼠(P<0.01)。絲膠治療組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠的血肌酐和尿素氮含量明顯低于糖尿病模型組(P<0.01,P<0.05),且絲膠治療組與陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)明顯差別(P>0.05)。
　　4.各組大鼠腎臟MEK1/2的表達(dá):MEK1/2蛋白免疫陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕褐色顆粒狀,主要位

6、于腎小管上皮細(xì)胞的胞漿,尤其是擴(kuò)張和上皮發(fā)生損害的腎小管;偶見腎小球球內(nèi)系膜細(xì)胞胞漿MEK1/2免疫陽(yáng)性染色。與正常對(duì)照組大鼠相比,糖尿病模型組大鼠腎臟MEK1/2蛋白及mRNA的表達(dá)明顯升高(P<0.01);絲膠治療組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠腎臟MEK1/2蛋白及mRNA的表達(dá)明顯低于糖尿病模型組大鼠(P<0.01);且絲膠治療組與陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)明顯差別(P>0.05)。
　　5.各組大鼠腎臟pERK1/2的表達(dá):pERK1/2蛋白免

7、疫陽(yáng)性產(chǎn)物位于細(xì)胞漿,呈棕黃色顆粒狀,免疫陽(yáng)性細(xì)胞包括腎小球球內(nèi)系膜細(xì)胞、足細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞,尤其是擴(kuò)張和上皮發(fā)生損害的腎小管上皮細(xì)胞。與正常對(duì)照組大鼠相比,糖尿病模型組大鼠腎臟pERK1/2蛋白及mRNA的表達(dá)明顯升高(P<0.01);絲膠治療組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠腎臟pERK1/2蛋白及mRNA的表達(dá)明顯低于糖尿病模型組大鼠(P<0.01,P<0.05);且絲膠治療組與陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)明顯差別(P>0.05)。
　　6.各組大

8、鼠腎臟c-fos的表達(dá):c-Fos蛋白免疫陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒狀,主要位于擴(kuò)張和上皮發(fā)生損害的腎小管上皮細(xì)胞的胞漿。與正常對(duì)照組大鼠比較,糖尿病模型組大鼠腎臟c-fos蛋白及mRNA的表達(dá)明顯升高(P<0.01);絲膠治療組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠腎臟c-fos蛋白及mRNA的表達(dá)明顯低于糖尿病模型組大鼠(P<0.01,P<0.05);且絲膠治療組與陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)明顯差別(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.絲膠可降低DN大鼠血