纈沙坦對(duì)早期糖尿病大鼠腎臟及JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響.pdf

1、目的:糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetesreellitus,DM)最常見、最嚴(yán)重的慢性并發(fā)癥之一。C-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminal Kinase,JNK)信號(hào)傳導(dǎo)通路能被多種因素激活,如細(xì)胞因子、環(huán)境應(yīng)激等,激活的JNK信號(hào)通路參與了多種生命過程,如細(xì)胞分化、細(xì)胞調(diào)亡等[1]。糖尿病狀態(tài)下,糖代謝異常、各種細(xì)胞因子的作用以及腎臟血流動(dòng)力學(xué)改變均可引起腎臟細(xì)胞內(nèi)信號(hào)

2、轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)生改變,在一定程度上導(dǎo)致和加速了DN的發(fā)生及發(fā)展。研究表明,腎素一血管緊張素系統(tǒng),尤其是血管緊張素Ⅱ在DN的發(fā)生和進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。本課題通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)糖尿病大鼠腎組織中MKK7、JNK、c-Jun及p-JNK的表達(dá)和腎組織細(xì)胞凋亡程度;探討JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路在糖尿病大鼠腎組織損害中的作用;研究血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑纈沙坦對(duì)糖尿病大鼠腎損害的影響及可能的機(jī)制。
　　 方法:
　　 清潔級(jí)雄性Wistar大鼠

3、45只,隨機(jī)分為3組:正常對(duì)照組(normalcontrol group,NC組,10只)、糖尿病組(diabetic model group,DM組)及纈沙坦組(diabetic model group with valsartan treatment,Val組,兩組共35只)。DM組及Val組大鼠禁食12小時(shí)后,空腹?fàn)顟B(tài)下按60mg/kg給予STZ腹腔注射,對(duì)照組腹腔注入等量檸檬酸緩沖液。72h后測(cè)隨機(jī)血糖兩次≥16.7mmol/L

4、為DM建模成功,共34只,不合格1只棄去,分各組17只。Val組給予纈沙坦10mg/kg/d灌胃,DM組及NC組喂以等量飲用水,共治療8周。實(shí)驗(yàn)期間大鼠自由飲水、進(jìn)食,不使用其他藥物。第4周末各組隨機(jī)選擇處理一半大鼠,余下大鼠8周末時(shí)處理,稱大鼠體重及腎重,留取血、尿標(biāo)本分別測(cè)定血糖(BG)、血白蛋白(ALB)、血肌酐(Scr)、血甘油三酯(TG)、血膽固醇(CHO)、高密度脂蛋白(HDL),低密度脂蛋白(LDL)、尿素氮(BUN)、尿

5、酸(UA)及24小時(shí)尿蛋白定量,計(jì)算大鼠腎臟肥大指數(shù)(KW/BW)。免疫組織化學(xué)法定位檢測(cè)腎組織JNK、p-JNK及c-Jun的表達(dá);Western blotting技術(shù)半定量檢測(cè)MKK7、JNK、p-JNK及c-Jun蛋白在腎組織表達(dá)水平;流式細(xì)胞儀檢測(cè)腎組織細(xì)胞凋亡程度。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±S)表示,組間比較采用方差分析,在SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件上進(jìn)行。
　　 結(jié)果:
　　 1：各組BG、體重、

6、腎重KW/BW及尿蛋白定量結(jié)果:DM組大鼠與NC組比較,BG升高、體重下降、腎重增加、KW/BW升高、尿蛋白定量增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Val組大鼠與DM組比較,24h尿蛋白定量降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2：免疫組化:4周末及8周末NC組大鼠腎小球、腎小管及腎間質(zhì)都有少量的JNK、c-Jun及p-JNK表達(dá)。4周末DM組大鼠腎小球、腎小管及腎間質(zhì)中JNK、c-Jun及p-JNK表達(dá)增加,以腎

7、小管胞漿及腎間質(zhì)表達(dá)增多更顯著,較NC組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);8周末DM組大鼠腎組織中JNK、c-Jun及p-JNK腎小管胞漿、腎間質(zhì)及部分腎小球表達(dá)增多更明顯,較NC組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。4周末Val組大鼠與相應(yīng)DM組比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;8周末Val組大鼠與相應(yīng)DM組比較,腎組織中JNK、c-Jun及p-JNK表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3：Western blotting:

8、8周末DM組大鼠腎組織MKK7、JNK、c-Jun及p-JNK表達(dá)與4周末DM組相應(yīng)指標(biāo)比較,蛋白表達(dá)增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);8周末Val組大鼠腎組織p-JNK蛋白表達(dá)與4周末Val組相應(yīng)指標(biāo)比較,表達(dá)增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而JNK及c-Jun差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。4周末與8周末DM組及Val組大鼠腎組織各因子蛋白表達(dá)較NC組大鼠相應(yīng)指標(biāo)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。8周

9、末Val組大鼠腎組織各指標(biāo)蛋白表達(dá)與8周末DM組相比均有所降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。4周末NC組與8周末NC組之間沒有明顯差異(P＞0.05)。
　　 4：DM組腎組織細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯高于NC組,Val組細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯低于DM組。腎組織中MKK7、JNK、c-Jun及p-JNK的表達(dá)與腎組織細(xì)胞凋亡呈正相關(guān)。
　　 結(jié)論:
　　 糖尿病時(shí)腎組織中MKK7、JNK、c-Jun及p-JNK的表達(dá)上調(diào),