纈沙坦對(duì)糖尿病大鼠腎組織中JNK通路和bcl-2因子的干預(yù)作用.pdf

1、目的:糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy,DN)是糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)最常見(jiàn)而嚴(yán)重的并發(fā)癥,其發(fā)生率呈逐年上升的趨勢(shì),經(jīng)統(tǒng)計(jì),由DN而引起的終末期腎病(end stage renal disease,ESRD)在發(fā)達(dá)國(guó)家已占40％～50％。據(jù)了解,在糖尿病腎病的腎組織中有細(xì)胞凋亡的存在,近年來(lái),國(guó)內(nèi)外細(xì)胞凋亡的研究越來(lái)越深入,JNK通路引起細(xì)胞凋亡途徑是近年才發(fā)現(xiàn)的一種凋亡途徑。Bcl-2

2、是bcl-2家族中最有代表性的抑制細(xì)胞凋亡的因子之一。糖尿病腎病時(shí)腎臟細(xì)胞凋亡是否與JNK通路有關(guān),JNK通路與bcl-2的表達(dá)是否有一定的相關(guān)性,纈沙坦減少尿蛋白,保護(hù)腎臟功能的作用是否與抑制細(xì)胞凋亡有一定關(guān)系,關(guān)于這些問(wèn)題的研究報(bào)道不多,本研究應(yīng)用1型糖尿病大鼠模型,檢測(cè)了腎臟JNK、p-ink、c-Jun和bcl-2的表達(dá)和細(xì)胞凋亡程度,同時(shí)了解纈沙坦是否對(duì)JNK通路和bcl-2表達(dá)有影響。
　　 方法:
　　 將

3、清潔級(jí)Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照(N組)和實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組腹腔注射鏈脲佐菌素,N組只注射等體積的枸櫞酸鹽緩沖液,將造模成功的大鼠隨機(jī)分為糖尿病組(DM組)和藥物干預(yù)組(T組),T組于造模成功后第一天給予纈沙坦灌胃,其余兩組給予等量安慰劑。于注射STZ后2、4、8周留取三組大鼠的24小時(shí)尿液測(cè)尿蛋白定量,于4周和8周分兩次處理大鼠,檢測(cè)定血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL

4、-C)、血漿白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)和尿酸(UA),用免疫組化和Western blotting檢測(cè)腎組織中JNK、p-jnk、c-Jun和bcl-2蛋白表達(dá),流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)腎臟細(xì)胞凋亡。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì),數(shù)據(jù)用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示,組間比較方差齊采用方差分析,方差不齊采用非參數(shù)檢驗(yàn),應(yīng)用pearson方法進(jìn)行相關(guān)性分析,P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:

5、　　 1.腎重指數(shù)(KW/BW):4周時(shí)DM組KW/BW與N組KW/BW比較明顯增加(P＜0.01);T組與DM組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),但T組高于N組(P＜0.01);8周時(shí)DM組與N組比較明顯增加(P＜0.01);T組與DM組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),但T組仍有高于N組(P＜0.01)。
　　 2.尿蛋白定量:2周和4周時(shí)DM組和T組尿蛋白定量與N組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);8周時(shí)D

6、M組與N組比較,排出明顯增加(P＜0.05);T組較DM組減少(P＜0.05),但T組始終高于N組(P＜0.05)。
　　 3.血糖水平:4周DM組和T組血糖值與N組血糖值比較水平明顯升高(P＜0.01);8周時(shí)DM組和T組血糖值與N組血糖值比較血糖水平明顯升高(P＜0.01)提示造模成功,并很好維持:T組與DM組之間比較血糖水平有一定程度降低但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。說(shuō)明本研究中所述指標(biāo)變化與血糖水平無(wú)關(guān)。
　　

7、 4.血脂、腎功能和血漿白蛋白水平:TG、TC、LDL-C、HDL-C、BUN、Scr、UA租ALB在三組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 5.免疫組化:JNK、p-jnk和c-Jun表達(dá)結(jié)果:4周N組大鼠腎小球、近端及遠(yuǎn)端腎小管均有微量JNK、c-Jlun和p-jnk表達(dá);DM組和T組大鼠腎小球,腎小管及腎間質(zhì)中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目增加,DM組較N組明顯升高(P＜0.05),T組較DM組降低但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);8周DM組大鼠腎

8、組織中JNK、c-Jun和p-jnk在腎小球,腎小管及腎間質(zhì)中表達(dá)均較4周時(shí)增加,以腎小管的表達(dá)增加更加明顯,DM組較N組明顯升高(P＜0.05);T組較DM組降低(P＜0.05),T組較N組表達(dá)也有增高(P＜0.05)。Bcl-2在三組大鼠腎臟中均有表達(dá),4周時(shí)N組bcl-2主要表達(dá)于腎小管,DM組和T組bcl-2表達(dá)在近曲小管明顯減少,T組較DM組bcl-2表達(dá)在近曲小管略有增加,在遠(yuǎn)端小管增加較明顯;DM組較N組明顯降低(P＜0.

9、05),T組較DM組升高但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);8周時(shí)T組、DM組和N組中bcl-2的表達(dá)依次減少,DM組較N組明顯降低(P＜0.05),T組較DM組升高(P＜0.05),8周時(shí)T組較N組表達(dá)也有降低(P＜0.05)。
　　 6.Western blotting:4周時(shí),DM組、T組和N組三組間JNK、c-Jun、p-jnk以及bcl-2表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);8周時(shí)DM組JNK、c-Jun和p-jn

10、k表達(dá)較N組增加(P＜0.05),bcl-2表達(dá)降低(P＜0.05),T組JNK和c-Jun表達(dá)比DM組降低(P＜0.05),與N組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);T組p-jnk比DM組降低(P＜0.05),比N組升高(P＜0.05);T組bcl-2較DM組升高(P＜0.05),較N組降低(P＜0.05)。
　　 7.流式細(xì)胞學(xué):4周時(shí)DM組大鼠腎組織細(xì)胞凋亡率較N組增加(P＜0.05),與T組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0

11、.05),T組與N組比較無(wú)差別;8周時(shí)DM組大鼠腎組織細(xì)胞凋亡率較N組增加更明顯(P＜0.05),T組與DM組相比較凋亡率降低(P＜0.05),T組較N組凋亡率升高(P＜0.05)。
　　 8.相關(guān)性分析:JNK,p-jnk,c-Jun與細(xì)胞凋亡程度呈正相關(guān)(P＜0.01);bcl-2與細(xì)胞凋亡程度及JNK,p-jnk,c-Jun均呈負(fù)相關(guān)(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1.1型糖尿病大鼠腎臟損傷早期就已