糖尿病大鼠腎臟中CTGF表達變化及川芎嗪與氯沙坦聯(lián)合干預(yù)作用研究.pdf

1、目的： 觀察血管緊張素Ⅱ受體1(ATl)拮抗劑氯沙坦和中藥川芎嗪聯(lián)合治療前后糖尿病大鼠腎組織中結(jié)締組織生長因子(CTGF)表達的變化，分析其與纖維化相關(guān)指標(biāo)Ⅳ型膠原(COL-Ⅳ)等的相關(guān)關(guān)系，來探討氯沙坦與川芎嗪聯(lián)合干預(yù)對糖尿病大鼠的腎臟保護作用及CTGF在糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展中的作用及意義。目前，尚未見相同的研究報道。 研究方法： (1)實驗分組：40只雄性Wistar大鼠，行右側(cè)腎臟切除術(shù)。隨機分為腎切除對照組

2、(NC組)、糖尿病組(DM組)、氯沙坦治療組(DMl組)、川芎嗪與氯沙坦聯(lián)合治療組(DM2組)、每組各10只。DM組、DMl組及DM2組禁食10h后，按50mg/kg一次性腹腔注射STZ溶液，NC組注射等量枸櫞酸緩沖液，72h后尾靜脈采血，測FBG≥16.7mmol/L者確認(rèn)造模成功納入實驗。實驗期間所有大鼠自由飲水進食，糖尿病各組不使用胰島素及其他降糖藥物。其中DMl組、DM2組在模型建立72h后分別給予氯沙坦(20mg·kg<'-1

3、>．d<'-1>)、氯沙坦(20 mg．kg<'-1>．d<'-1>)和川芎嗪(200mg．kg<'-1>．d<'-1>)灌胃，DM組僅給予等量生理鹽水(10 ml．kg<'-1>．d<'-1>)灌胃，所有大鼠每周檢測一次血糖。 (2)第8周末留取大鼠24h尿液并檢測其尿肌酐、尿白蛋白排泄率(UAER)、β<,2>-MG，進行組間差異比較并分析各指標(biāo)之間的相關(guān)性；8周后一次性處死大鼠，腹主動脈留取動脈血約4ml，測FBG、血肌酐

4、等。 (3)取部分腎組織，剝離被膜，稱重，10﹪福爾馬林固定、石蠟包埋、切片，HE染色鏡下觀察糖尿病腎臟常規(guī)病理變化。SABC免疫組化方法檢測各組腎小球、腎小管CTGF、COL-Ⅳ蛋白的表達情況。每張切片隨機取2～3個高倍鏡視野(×400)，采用Leica Qwin V3圖像分析軟件，分別分析腎小管、腎小球區(qū)域陽性著色的灰度，比較四組之間灰度值。其余部分置于液氮保存，以行RT-PCR檢測腎組織中CTGF、COL-Ⅳ的mRNA水平

5、。收集并整理實驗數(shù)據(jù)，應(yīng)用方差分析t檢驗等進行統(tǒng)計分析，p<0.05為有顯著性差異。 結(jié)果： 1．試驗前各組大鼠體重、血糖基礎(chǔ)值無顯著性差異(p>0.05)，條件齊同。 2．8周后，DM組、DMl組、DM2組大鼠的血糖、HbAlc、Ccr、uAE、β<,2>-MG及腎組織中CTGF、COL-Ⅳ水平均顯著高于NC組(p均<0.05)。 3．免疫組化及RT-PCR結(jié)果均顯示DM組大鼠腎組織中CTGF、COL-

6、Ⅳ水平明顯高于DMl組、DM2組(p<0.01)。 4．DM1組、DM2組腎組織中CTGF、COL-Ⅳ水平及Ccr、UAE、β<,2>-MG均明顯低于DM組(p<0.01)，聯(lián)合組優(yōu)于單給藥組(p<0.05)。 5．相關(guān)分析：將各組大鼠腎臟CTGF表達水平與相應(yīng)的纖維化指標(biāo)進行相關(guān)分析，結(jié)果顯示CTGF表達水平與COL-Ⅳ、大鼠尿微量白蛋白及腎臟肥大指數(shù)等的表達均存在正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為r=0.327、r=0.83

7、7、r=0.826，p均<0.05。 結(jié)論： (1) DM大鼠腎組織中CTGF、COL-Ⅳ表達顯著升高，24小時尿蛋白排泄量增多；氯沙坦及川芎嗪干預(yù)可明顯下調(diào)腎組織中CTGF、COL-Ⅳ的表達，并能明顯改善24小時尿蛋白排泄量。 (2)DM大鼠腎組織中COL-Ⅳ表達升高，并與CTGF密切相關(guān)，可能是DM腎病發(fā)生和發(fā)展的病理基礎(chǔ)；氯沙坦及川芎嗪可下調(diào)腎組織CTGF和ECM的表達，提示可能有助于延緩腎小球硬化進程。