RhoA在2型糖尿病大鼠腎臟的表達(dá)及辛伐他汀的干預(yù)作用.pdf

1、目的：糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病(diabetes mellims，DM)常見(jiàn)的慢性微血管并發(fā)癥之一，隨著糖尿病患病率逐年增高及發(fā)病人群的低齡化，DN的患病人數(shù)也逐年上升，在發(fā)達(dá)國(guó)家糖尿病所致的終末期腎病(end stage renal disease，ESRD)己成為腎功能衰竭的首位原因，我國(guó)也有這種趨勢(shì)。RhoA在腎臟皮質(zhì)中高表達(dá)，可能在糖尿病腎損害中發(fā)揮作用。他汀類(lèi)藥物不僅有調(diào)脂的腎臟保護(hù)

2、作用，而且還有抗炎癥、免疫調(diào)節(jié)等非依賴調(diào)脂的腎臟保護(hù)作用。本研究通過(guò)高糖高脂膳食飼養(yǎng)Sprague-Dawlay(SD)大鼠，再注射小劑量鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)，誘發(fā)胰島素抵抗和高血糖，從而復(fù)制2型糖尿病(T2DM)大鼠模型，觀察糖尿病大鼠腎臟RhoA表達(dá)水平、形態(tài)學(xué)改變及辛伐他汀治療的影響，探討RhoA在2型糖尿病腎臟病變中的作用和辛伐他汀腎臟保護(hù)作用及機(jī)制。 方法：從50只SD大鼠中隨機(jī)抽取10只

3、作為正常對(duì)照組(A組)，其余作為實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組喂以普通飼料，實(shí)驗(yàn)組喂以高糖高脂飼料(普通飼料中加入20％蔗糖、2.5％膽固醇、15％熟豬油)。4周后實(shí)驗(yàn)組大鼠出現(xiàn)胰島素抵抗(IR)，再給予STZ 30 mg/kg腹腔注射。于實(shí)驗(yàn)第6周末選取空腹血糖(FBG)＞7.8 mmol/L且伴有胰島素敏感性降低者作為T(mén)2DM動(dòng)物模型，并隨機(jī)分為2組，即T2DM模型組(B組)、T2DM辛伐他汀治療組(C組)。實(shí)驗(yàn)持續(xù)時(shí)間共14周。于第6周末心臟取血

4、測(cè)定FBG、空腹胰島素(FINS)、胰島素敏感指數(shù)(ISI)、血肌酐(Scr)與三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)以及極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL-C)水平。第14周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束前，代謝籠收集24小時(shí)尿液，測(cè)定尿白蛋白與尿肌酐(Ucr)，并計(jì)算內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)。取大鼠腎皮質(zhì)行光鏡(HE染色、PAS染色、Masson染色)及電鏡觀察。免疫組化檢測(cè)RhoA在腎皮質(zhì)中

5、的表達(dá)，應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)計(jì)算腎皮質(zhì)中RhoA的積分光密度(IOD)值。使用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，兩組比較采用t/t'檢驗(yàn)，組間比較采用方差分析，相關(guān)分析采用直線相關(guān)。結(jié)果1實(shí)驗(yàn)第6周末各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)：注射STZ兩周后，實(shí)驗(yàn)組大鼠FBG(12.99±1.16)mmol/L高于正常對(duì)照組(5.03±0.69)mm01/L，F(xiàn)INS 18.79(18.23，19.29)mIU/L與對(duì)照組18.35(17.95，18.98

6、)mIU/L比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，ISI 0.0048(0.0045，0.0053)低于正常對(duì)照組0.0106(0.0103，0.0112)(均P＜0.01)，至此T2DM模型復(fù)制成功。 2實(shí)驗(yàn)14周末生化指標(biāo)：A組大鼠FBG(4.96±0.92)mmol/L、TG(0.67±0.21)mmol/L、TC(2.23 ±0.43)mmol/L、LDL-C(1.22±0.31)mmol/L、VLDL-C(0.39±0.2

7、4)mmol/L，HDL-c(0.87±0.24、)mmol/L，B組大鼠FBG(13.15±1.18)mmol/L、TG、TC、LDL-C及VLDL-C水平均高于A組，HDL-C水平低于A組(均P＜0.05)；C組大鼠TG、TC、LDL-C及VLDL-C水平均低于B組，HDL-C水平高于B組(均P＜0.05)，F(xiàn)BG(12.70±1.05)mmol/L雖較B組有所降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3腎重指數(shù)：與A組(3.59 ±0.29)比較，

8、B組腎重指數(shù)(8.96±1.08)明顯增加(P＜0.01)，提示腎臟肥大；與B組比較，C組腎重指數(shù)(7.01 ±0.97)減小(P＜0.01)，但仍高于A組(P＜0.01)。 4尿白蛋白：與A組(0.03±0.21mg/24h)比較，B組尿白蛋白(1.37±0.05mg/24h)明顯增加(p＜0.01)；與B組比較，C組尿白蛋白(0.66±0.02mg/24h)明顯減少，但仍高于A組(p＜0.01)。 5腎功能：①BUN

9、：B組(8.22±1.36)mmol/L和C組(7.75±1.52)mmol/L與A組(6.99±1.45)mmol/L比較，BUN水平變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。②scr：B組(62.59±10.45)μmol/L和C組(60.88±10.10)μmol/L與A組(60.50±6.02)μmol/L比較，Scr水平變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。③Ccr： B組Ccr(1.32±0.36ml/min/100g)明顯高于A組(0

10、.12±0.06ml/min/100g)(p＜0.01)；C組Ccr(0.47±0.35ml/min/100g)低于B組，但仍高于A組(p＜0.01)。 6組織形態(tài)學(xué)改變：光鏡顯示，HE染色：A組腎小球形態(tài)規(guī)則，腎小球內(nèi)細(xì)胞排列規(guī)則，腎小球毛細(xì)血管網(wǎng)基底膜清晰規(guī)整，包曼氏囊腔清晰可見(jiàn)；B組腎小球體積明顯增大，腎小球內(nèi)細(xì)胞明顯增多；C組腎小球體積有所減小，腎小球內(nèi)細(xì)胞有所減少，但與A組仍有差別。PAS染色：A組腎小球形態(tài)規(guī)則，有少

11、量PAS陽(yáng)性物質(zhì)；B組PAS陽(yáng)性物質(zhì)增多，腎小球毛細(xì)血管網(wǎng)基底膜普遍增厚，個(gè)別視野可見(jiàn)腎小球滲出性病變，表現(xiàn)為囊滴；C組病變略有減輕，表現(xiàn)為腎小球輕度增大，腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)目無(wú)明顯增多，腎小球毛細(xì)血管網(wǎng)基底膜輕微增厚。Masson染色：A組大鼠腎小球毛細(xì)血管網(wǎng)基底膜清晰規(guī)整，腎小球系膜區(qū)基質(zhì)呈藍(lán)色；B組腎小球肥大，基底膜明顯增厚，系膜區(qū)基質(zhì)明顯增多，膠原纖維增加；C組病變明顯減輕，系膜區(qū)基質(zhì)略有減少，基底膜輕微增厚，膠原纖維明顯減少。電鏡

12、顯示，A組大鼠腎小球細(xì)胞基底膜均勻一致，足突排列整齊，內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)正常；B組腎小球基底膜彌漫性增厚，呈丘狀隆起，相鄰足突大部分融合，內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)增多；C組腎小球基底膜彌漫性增厚程度及系膜基質(zhì)增多程度有所減輕，足突尚存，但與A組仍有差別。 7免疫組化檢測(cè)：免疫組化圖像分析顯示，B組大鼠腎皮質(zhì)RhoA蛋白表達(dá)的IOD值(50.81±5.19)是A組(5.02±1.70)的10.1倍，C組(20.47±3.63)是B組的40.3％，差別具有統(tǒng)