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文檔簡介
1、目的:研究辛伐他汀對1型糖尿病大鼠腎臟組織中Toll樣受體(TLR)4和單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)表達的影響。探究辛伐他汀在糖尿病腎病中,發(fā)揮其腎臟保護作用的可能機理,為臨床提供實驗依據(jù)。
方法:Wistar大鼠54只,體重180~220g,由山西醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供,實驗大鼠為清潔級。將大鼠隨機分為三組:正常對照組(NC組)、糖尿病組(DM組)、辛伐他汀干預(yù)組(S組),每組18只。禁食12小時后,造模組大鼠單
2、次腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)55mg/kg,而NC組大鼠給予檸檬酸一檸檬酸鈉溶液55mg/kg。造模72h后,切斷尾靜脈采血測血糖,隨機血糖連續(xù)三次≥16.7mmol/L為造模成功。各組在造模成功后1周給予干預(yù),采取灌胃的方法。S組大鼠以辛伐他汀生理鹽水混懸液10mg/kg/d干預(yù),NC組和DM組大鼠每天以等體積的生理鹽水干預(yù)。每周稱體重。各組在干預(yù)后的第4周、8周和12周隨機選取6只大鼠稱重,斷尾靜脈采
3、血測血糖;麻醉大鼠,腔靜脈穿刺采血,分離血清測血胰島素;代謝籠收集大鼠一天的尿液,測定24h尿白蛋白排泄率。脫臼法處死大鼠,分離腎臟。取少部分腎臟組織液氮速凍后,保存于-70℃,用于實時熒光定量-PCR實驗,測定腎臟組織TLR4和MCP-1mRNA表達量。剩下的腎臟組織以10%中性甲醛固定、梯度酒精脫水、石蠟包埋,制作成石蠟切片。切片經(jīng)HE染色,在光鏡下觀察腎臟組織形態(tài)學(xué)的變化。切片通過免疫組織化學(xué)實驗測定腎臟組織中TLR4和MCP-1
4、的蛋白表達量。
結(jié)果:1、三組大鼠血糖及血胰島素的比較:除NC組外,其余兩組大鼠血糖均明顯增高,血胰島素均降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
2、三組大鼠24h尿白蛋白排泄率的比較:除NC組外,其余兩組大鼠的24h尿白蛋白排泄率均明顯增多(P<0.05);與DM組相比,用辛伐他汀治療后的24h尿白蛋白排泄率明顯減低(P<0.05)。
3、三組大鼠腎臟組織中TLR4和MCP-1蛋白表達的比較
5、(免疫組化法):NC組腎臟組織中的TLR4和MCP-1蛋白低表達:同期與NC組相比,DM組和S組兩研究因子的蛋白表達量增加(P<0.05);與DM組相比,在辛伐他汀治療后兩因子的蛋白表達減少(P<0.05)。
4、12周三組大鼠腎臟組織中TLR4和MCP-1mRNA表達的比較:與NC組相比,DM組及S組TLR4和MCP-1mRNA表達增高(P<0.05);與DM組相比,辛伐他汀治療后TLR4和MCP-1mRNA表達減少(P
6、<0.05)。
5、糖尿病大鼠腎臟組織中TLR4、MCP-1的蛋白表達量與24h尿白蛋白排泄率均表現(xiàn)為正向相關(guān)(P<0.05)。
6、腎臟組織形態(tài)學(xué)觀察:NC組大鼠腎小球基底膜均勻一致,且無明顯增厚,腎小管及腎間質(zhì)清晰可見,鮮有炎癥細胞。DM組大鼠腎臟形態(tài)學(xué)改變較明顯:腎小球毛細血管腔塌陷、閉塞,腎小球體積增大;系膜區(qū)增寬,基膜增厚和系膜基質(zhì)增多,淋巴細胞數(shù)量增多;腎小管上皮細胞腫脹、變性,腎間質(zhì)可見大量淋巴
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