腎衰寧對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠腎臟損傷的干預(yù)作用及其機(jī)制.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)建立糖尿病大鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,觀察中成藥腎衰寧對(duì)糖尿病大鼠的腎臟功能、腎臟病理學(xué)改變、腎組織中細(xì)胞外基質(zhì)成分(ECM)以及腎臟纖維化相關(guān)因子轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-B1)、纖溶酶原激活物抑制劑-l(PAI-1)及組織性基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1)等指標(biāo)表達(dá)的影響,探討單獨(dú)應(yīng)用腎衰寧及其聯(lián)合貝那普利對(duì)糖尿病大鼠早期腎臟損傷的保護(hù)作用及其可能機(jī)制,從而為臨床應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

2、　　 方法:健康雄性Wistar大鼠40只,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)選取8只作為正常對(duì)照組(N組),其余32只按照65rag/kg劑量左下腹腔一次性注射STZ制成糖尿病模型,正常對(duì)照組則注射等量枸櫞酸鈉-枸櫞酸三鈉緩沖液。將注射STZ的大鼠再隨機(jī)分為糖尿病模型組(M組)、貝那普利治療組(B組)、腎衰寧治療組(S組)和腎衰寧聯(lián)合貝那普利治療組(BS組),每組8只。于復(fù)制模型成功后每日灌胃給藥1次,用藥劑量:腎衰寧-0.7g/kg,貝那普利

3、-4mg/kg,正常對(duì)照組和模型組大鼠則給予等量的生理鹽水灌胃,給藥時(shí)間為8周。分別于實(shí)驗(yàn)第4、8周末尾靜脈采血檢測(cè)各組大鼠血糖,于8周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)檢測(cè)各組大鼠血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、24h尿蛋白定量以及腎重/體重等指標(biāo),并進(jìn)行腎臟病理學(xué)檢查,通過(guò)HE、PAS及MASSON染色對(duì)比觀察各組大鼠腎臟病理學(xué)變化,同時(shí)測(cè)定腎小球面積(GA)、細(xì)胞外基質(zhì)面積(ECM)以及二者的比值(ECM/GA)。采用免疫組化方法檢測(cè)腎組織中TGF

4、-β1、層粘連蛋白(LN)及Ⅳ型膠原蛋白(ColⅣ)的表達(dá),應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR測(cè)定腎組織中TGF-β1、PAI-1及TIMP-1等分子生物學(xué)指標(biāo)mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
　　 結(jié)果:
　　 (1)與N組相比,M組和各治療組血糖、SCr、BUN、24h尿蛋白定量及腎重/體重均明顯增加(P＜0.01);與M組相比,各治療組上述各指標(biāo)除血糖外(P＞0.05),其余指標(biāo)均明顯降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);治療組之

5、間,BS組與S組和B組相比,除血糖及BUN外(P＞0.05),其余指標(biāo)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05或P＜0.01),而S組與B組相比,其SCr、24h尿蛋白定量明顯減少(P＜0.01),大鼠體重明顯增加(P＜0.05),其余指標(biāo)則未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 (2)各組大鼠腎組織病理學(xué)變化:N組腎臟結(jié)構(gòu)清晰,未見(jiàn)明顯腎小球、腎小管及間質(zhì)的改變;M組可見(jiàn)糖尿病早期腎臟損害的病理改變,表現(xiàn)為腎小球體積增大,基底膜增厚,系

6、膜細(xì)胞及系膜基質(zhì)增生,腎小管部分上皮細(xì)胞空泡變性、脫落,腎間質(zhì)較多炎性細(xì)胞浸潤(rùn);與M組相比,各治療組的腎臟病理學(xué)改變減輕。
　　 病理學(xué)檢測(cè)指標(biāo)變化:與N組相比,M組和各治療組GA、ECM及ECM/GA均明顯增加(P＜0.01);與M組相比,各治療組上述各指標(biāo)均明顯降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);治療組之間,BS組與S組和B組相比,上述指標(biāo)降低更為明顯(P＜0.01),而S組與B組相比,上述指標(biāo)未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05

7、)。
　　 (3)免疫組化結(jié)果:與N組相比,M組及各治療組腎組織中TGF-B1、LN及ColⅣ的表達(dá)均明顯增加(P＜0.01);與M組相比,各治療組上述指標(biāo)均明顯降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);治療組之間,BS組與S組和B組相比,也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05或P＜0.01),即上述指標(biāo)的降低相對(duì)更明顯,而S組與B組相比,上述指標(biāo)未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 (4)RT-PCR結(jié)果顯示:與N組相比,M組和

8、各治療組腎組織中TGF-β1、PAI-1及TIMP-1mRNA的相對(duì)表達(dá)量明顯升高(P＜0.01);與M組相比,各治療組上述指標(biāo)均明顯降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01);治療組之間,BS組與S組和B組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01),即BS組降低上述指標(biāo)mRNA相對(duì)表達(dá)量的作用更明顯;而S組與B組比較,其TGF-β1及TIMP-1表達(dá)未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05),但降低PAI-1mRNA表達(dá)的作用S組比B組更顯著(P＜0.05)。

9、
　　 結(jié)論:腎衰寧單獨(dú)應(yīng)用,在糖尿病的早期腎損害過(guò)程中可與貝那普利發(fā)揮相似的腎臟保護(hù)作用,其能夠降低糖尿病大鼠的尿蛋白排泄,改善腎臟功能,減輕腎臟病理學(xué)損傷。同時(shí),腎衰寧與貝那普利相比,其在降低血肌酐、減少尿蛋白排泄以及改善糖尿病大鼠消瘦狀態(tài)、增加體重方面作用更為顯著。其腎臟保護(hù)作用的主要機(jī)制可能為下調(diào)腎臟TGF-β1、PAI-1及TIMP-1的表達(dá),從而降低腎組織中ColⅣ、LN等細(xì)胞外基質(zhì)成分的積聚,延緩腎臟纖維化進(jìn)程。此