普羅布考對(duì)糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：糖尿病腎病(DN)是導(dǎo)致終末期腎衰的主要原因之一。研究證明，在糖尿病持續(xù)高糖狀態(tài)下，氧自由基生成增多在糖尿病腎病發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。普羅布考是一種降脂抗氧化劑，在降低TC、TG、LDL-C的同時(shí)，HDL-C有輕度降低。同時(shí)，作為一種抗氧化劑具有重要的機(jī)體保護(hù)作用。本研究旨在觀察普羅布考對(duì)糖尿病大鼠腎臟氧化應(yīng)激反應(yīng)和腎臟α-SMA、CTGF、TGF-β、FN的影響及其機(jī)制，探討其對(duì)糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用。 方法：健康的

2、SD(sprague-Dawley)雄性大鼠36只，隨機(jī)分成兩組：E組(正常對(duì)照組，喂養(yǎng)普通飼料，10只)，C組(喂養(yǎng)高糖高脂飲食，26只)，8周后測(cè)量血脂、血糖和血胰島素，并將C組注射STZ造模，血糖測(cè)定結(jié)果>16.67mmol/l為2型糖尿病造模成功。結(jié)果成模23只，將其重新分組：A組12只，B組(成模后予普羅布考500mg/kg/d干預(yù)8周組，11只)，A、B組大鼠繼續(xù)予高脂高糖飼料喂養(yǎng)8周，E組10只不變，繼續(xù)予普通飼料喂養(yǎng)8周

3、，后處死。各組大鼠處死前留取24小時(shí)尿液，檢測(cè)24h尿微量蛋白定量(UMA)。股動(dòng)脈取血測(cè)肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、甘油三醋(TG)、總膽固醇(TC)。取左腎稱重，計(jì)算腎臟肥大指數(shù)(KW/BW)。取部分腎組織制備組織勻漿，測(cè)腎皮質(zhì)丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)活性的變化。部分腎組織采用10％福爾馬林固定，石蠟切片，觀察腎臟的病理改變，并用免疫組化方法和計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)研究腎臟TG

4、F-β1、FN、α-SMA的表達(dá)水平，同時(shí)電鏡下觀察腎臟的超微病理改變。剩余組織置于液氮中，RT-PCR方法檢測(cè)CTGF、TGF-β1、α-SMAmRNA表達(dá)量。所得數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。 結(jié)果：(1)高糖高脂飲食8周后，STZ誘導(dǎo)2型糖尿病造模的成功率為88.46％。(2)高脂高糖喂養(yǎng)加小劑量STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠血糖、血脂較常規(guī)飼料喂養(yǎng)組明顯增高，胰島素抵抗指數(shù)升高，符合2型糖尿病發(fā)病特點(diǎn)。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)A

5、組大鼠血清的TG、TC、LDL-C水平明顯高于E組，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。B組大鼠的TC、LDL-C水平顯著低于A組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(4)各組大鼠UMA和KW/BW的變化：A和B組的24hUMA水平明顯高于E組(P<0.05)，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；B組的24hUMA水平較A組明顯降低(P<0.05)。A和B組的KW/BW明顯高于E組(P<0.05)，而A組、B組之間的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.

6、05)。(5)腎皮質(zhì)氧化還原指標(biāo)的變化：A組大鼠腎皮質(zhì)SOD、GSH-PX活性較E組顯著降低(P<0.05)，MDA含量顯著升高(P<0.05)；普羅布考干預(yù)后B組SOD、GSH-PX活性較A組升高，MDA含量較A組顯著下降，兩組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。(6)A組大鼠腎小球內(nèi)TGF-β1、α-SMA、FN蛋白表達(dá)較E組顯著增加(P<0.05)，CTGF、TGF-β1和α-SMAmRNA的表達(dá)較E組顯著增加(P<0.05)，普

7、羅布考干預(yù)后各組蛋白和mRNA表達(dá)均較A組明顯減少。(7)糖尿病組腎小球基膜增厚，系膜基質(zhì)增多，足細(xì)胞足突嚴(yán)重融合、脫落；B組足突融合嚴(yán)重程度介于E組和A組之間。 結(jié)論：(1)高糖高脂飲食加小劑量多次注射STZ可以成功誘導(dǎo)SD大鼠的T2DM模型，方法簡(jiǎn)單且成模率高；(2)糖尿病時(shí)腎組織抗氧化能力降低、氧化應(yīng)激增高，可能導(dǎo)致腎小球上皮細(xì)胞和腎小管間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)型分化增加，同時(shí)CTGF、TGF-β1、α-SMA、FN表達(dá)增加，腎臟肥大、