2型糖尿病模型的建立與評(píng)價(jià)及黃精多糖對(duì)2型糖尿病大鼠的影響.pdf

1、目的： 觀察不同周齡、不同飲食對(duì)大鼠胰島素抵抗的影響;觀察黃精多糖對(duì)2型糖尿病大鼠血糖和腦損傷的影響，并探討作用機(jī)制。 方法： 1.制備黃精多糖：用超聲波法萃取秋季泰山黃精，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮取定至生藥1g/ml，其溶于80％乙醇中，放至24小時(shí)后進(jìn)行抽濾，冷凍干燥機(jī)干燥后備用。 2.正常6w齡雄性SPF級(jí)SD大鼠5只，正常4w齡雄性SPF級(jí)SD大鼠63只。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)行分組飼養(yǎng)。其余大鼠隨機(jī)分為正常

2、飼料組13只，高鹽高脂飼料組5只，高糖高脂飼料組45只。正常飼料組5只，高鹽高脂飼料組5只，高糖高脂飼料組5只及高體重高糖高脂飼料組5只做鉗夾試驗(yàn)檢測(cè)大鼠胰島素敏感性建立胰島素抵抗模型。其余高糖高脂飼料組大鼠腹腔內(nèi)注射小劑量STZ(25 mg/kg)建立2型糖尿病大鼠模型，正常飼料組大鼠腹腔內(nèi)注射等劑量生理鹽水作對(duì)照。2型糖尿病模型隨機(jī)分為模型對(duì)照組(MC)、陽(yáng)性藥物對(duì)照組(鹽酸二甲雙胍0.83mmol/kg,MET)；黃精多糖(PSP

3、)治療低(100mg/kg)、中(200mg/kg)、高(400mg/kg)(PSP-L，PSP-M，PSP-H)劑量組，灌胃給藥治療4周，正常飼料組大鼠灌胃等劑量生理鹽水作為正常對(duì)照組(NC)，每組8只。并用血糖儀測(cè)定大鼠的葡萄糖耐量，用放免法測(cè)定血漿胰島素的含量，用免疫組化法及酶標(biāo)記免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)和測(cè)定腦組織中神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3(NT-3)的含量變化。 結(jié)果： 1.胰島素抵抗模型的建立 1.1

4、 普通飼料喂養(yǎng)組、高糖高脂喂養(yǎng)組及高鹽高脂喂養(yǎng)組大鼠，基礎(chǔ)體重及基礎(chǔ)血壓無(wú)顯著性差異，經(jīng)過(guò)四個(gè)月的喂養(yǎng)，與普通飼料喂養(yǎng)組比較，高糖高脂喂養(yǎng)組及高鹽高脂喂養(yǎng)組的腎臟周圍脂肪重量、SBP、空腹血漿胰島素對(duì)數(shù)值[Ln(FINS)]、穩(wěn)態(tài)血漿胰島素對(duì)數(shù)值[Ln(SINS)]明顯升高，葡萄糖輸注率(GIR60-120)明顯降低。高糖高脂喂養(yǎng)組與高鹽高脂喂養(yǎng)組比較，Ln(SINS)明顯降低。附睪周圍脂肪重量，三組之間無(wú)顯著性差異。 1.2

5、經(jīng)過(guò)四個(gè)月的喂養(yǎng)，與6w齡組大鼠，4w齡組大鼠腎臟周圍脂肪重量、附睪周圍脂肪重量及GIR60-120無(wú)顯著性差異，但喂養(yǎng)后收縮壓(SBP2)、Ln(FINS)、Ln(SINS)顯著性增加。 2 PSP對(duì)2型糖尿病模型大鼠的影響 2.1 對(duì)腦組織損傷的影響HE染色光鏡觀察：NC組神經(jīng)元形態(tài)規(guī)則、邊界清晰。MC組大鼠神經(jīng)元細(xì)胞大小不一，形態(tài)有所改變。神經(jīng)元細(xì)胞既有腫脹，也有皺縮。腦軟化，主要分布在白質(zhì)內(nèi)，見局灶區(qū)呈淡染的松網(wǎng)

6、狀結(jié)構(gòu)；脫髓鞘，多見于白質(zhì)內(nèi)，見白質(zhì)纖維局部疏松，呈泡沫狀，與糖尿病模型組比較，PSP治療組均使神經(jīng)元形態(tài)趨于正常，數(shù)量增多，排列緊湊；以高劑量組效果最明顯。 2.2 葡萄糖耐量試驗(yàn)與正常對(duì)照組相比較，模型組各時(shí)間點(diǎn)血糖濃度顯著升高；與模型組比較，PSP高劑量組(PSP-H)在0分鐘，PSP高、中、低劑量組在60、90、120分鐘時(shí)血糖濃度顯著降低；與鹽酸二甲雙胍組相比，PSP高、中、低劑量組在0分鐘時(shí)血糖濃度顯著升高，PSP中

7、、低劑量組在30分鐘時(shí)血糖濃度顯著升高。 2.3 對(duì)血脂的影響與正常對(duì)照組相比較，各模型組血脂濃度顯著升高；與模型對(duì)照組比較，PSP高、中、低劑量組血脂濃度顯著降低；與鹽酸二甲雙胍組相比，PSP中、低劑量組血漿T-CHO濃度顯著升高，PSP低劑量組血漿TG濃度顯著升高。 2.4 對(duì)有關(guān)自由基指標(biāo)的影響 2.4.1 腦組織中SOD的含量與正常對(duì)照組相比較，模型組大鼠腦組織內(nèi)SOD含量顯著降低；與模型對(duì)照組比較，PS

8、P高、中、低劑量組SOD含量顯著增高；與鹽酸二甲雙胍組相比，PSP高劑量組SOD含量顯著增高。由此可見黃精多糖可以增加機(jī)體抗氧化酶的活性，減輕脂質(zhì)過(guò)氧化損傷。 2.4.2 腦組織中MDA的含量與正常對(duì)照組比較，模型組腦組織中MDA的含量顯著升高；與模型對(duì)照組比較，PSP高、中、低劑量組腦組織中MDA的含量顯著降低；與鹽酸二甲雙胍組相比，PSP中、低劑量組腦組織中MDA的含量顯著升高。 2.5 PSP對(duì)2型糖尿病大鼠腦組織

9、NT-3的影響與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠腦組織內(nèi)NT-3含量顯著降低；與模型對(duì)照組比較，PSP高、中、低劑量組NT-3含量顯著增高；與鹽酸二甲雙胍組相比，PSP高、中、低劑量組NT-3含量顯著增高。 結(jié)論： 1.大鼠4個(gè)月的高糖高脂、高鹽高脂飲食，均可出現(xiàn)胰島素抵抗。 2.4周齡大鼠經(jīng)4個(gè)月的高糖高脂飲食比6周齡大鼠更易誘導(dǎo)出胰島素抵抗。 3.黃精多糖對(duì)2型糖尿病大鼠腦組織損傷有保護(hù)作用。機(jī)制與降低實(shí)驗(yàn)