丙酸睪酮激活Nrf2-ARE信號(hào)通路改善老年大鼠腎臟功能.pdf

1、在正常衰老過程中，腎臟會(huì)出現(xiàn)功能的進(jìn)行性衰退。組織學(xué)上檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，老年人和衰老大鼠均出現(xiàn)腎臟局灶節(jié)段性腎小球硬化和腎小球數(shù)量減少。形態(tài)學(xué)改變包括與年齡有關(guān)的系膜基質(zhì)擴(kuò)張，腎小球直徑增加，基底膜增厚和毛細(xì)血管循環(huán)的損失。年齡相關(guān)的腎小球疾病的病因是多因素的，包括細(xì)胞外基質(zhì)的合成和降解產(chǎn)物之間的不平衡，以及血流動(dòng)力學(xué)的改變。近年來的研究顯示，在各種組織中的老化與氧化應(yīng)激增加密切相關(guān)。核因子E2相關(guān)因子2（Nuclear factor E2-r

2、elated factor2，Nrf2）能夠誘導(dǎo)抗氧化反應(yīng)元件（Antioxidant response element， ARE）調(diào)節(jié)基因，被公認(rèn)為是一種主要的細(xì)胞抗氧化應(yīng)激防御機(jī)制。激活Nrf2-ARE途徑可能對(duì)機(jī)體具有保護(hù)作用。隨著年齡增長(zhǎng)，男性體內(nèi)睪酮水平含量降低。然而，睪酮是否能夠通過激活腎臟Nrf2-ARE途徑，對(duì)衰老的腎臟起到抗氧化應(yīng)激的保護(hù)作用，目前尚不清楚。
　　目的：探討長(zhǎng)期丙酸睪酮（Testosterone

3、propionate，TP）處理對(duì)老年大鼠腎功能及腎臟氧化應(yīng)激狀態(tài)的影響及Nrf2-ARE抗氧化應(yīng)激途徑參與的機(jī)制。
　　方法：成年雄性Wistar大鼠共30只隨機(jī)分成3組。6月齡組（6Mon， n=10），24月齡組（24Mon，n=10）和24月齡皮下TP處理組（24Mon-TP， n=10）。24Mon-TP組大鼠在大鼠21月齡時(shí)皮下注射TP，劑量2mg/kg，每日1次，共計(jì)給藥12周（84天）。6Mon組和24Mon組大鼠

4、同時(shí)只皮下注射芝麻油。每組各5只大鼠灌注固定后取腎臟用于免疫組織化學(xué)染色，另外5只大鼠直接斷頭取腎組織用于氧化應(yīng)激參數(shù)、實(shí)時(shí)定量PCR和免疫印跡檢測(cè)，用于免疫組織化學(xué)染色的大鼠麻醉后，于右心耳處收集靜脈血用于腎功能指標(biāo)ELISA測(cè)定。
　　結(jié)果：
　　1腎功能指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果
　　利用ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與6月齡大鼠相比，老年24月齡大鼠血清尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN）、肌酐（Creatinin

5、e，Cre）、尿酸（Uric acid，UA）和β2-微球蛋白（β2-microglobulin，β2MG）（P<0.01）的含量顯著增加，長(zhǎng)期TP處理后上述指標(biāo)明顯降低（P<0.01），但未達(dá)到6月齡組大鼠水平（P<0.01）。
　　2腎臟氧化應(yīng)激參數(shù)結(jié)果
　　通過氧化應(yīng)激參數(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與6月齡大鼠相比，老年24月齡大鼠腎臟丙二醛（Malondialdehyde，MDA）和脂質(zhì)過氧化物（Lipid peroxidation

6、， LPO）水平顯著升高（P<0.01），還原性谷胱甘肽（Reduced glutathione， GSH）、谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-px）、過氧化氫酶（Catalase，CAT）和超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）水平顯著降低（P<0.01），長(zhǎng)期TP處理后MDA和LPO水平顯著降低（P<0.01），GSH、GSH-px、CAT和SOD水平顯著增加（P<

7、0.01），但未達(dá)到6月齡組大鼠水平（P<0.01）。
　　3實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果
　　實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，與6月齡大鼠相比，老年24月齡大鼠腎臟Nrf2 mRNA、血紅素加氧酶-1（Home oxygenase-1，HO-1）mRNA和苯醌氧化還原酶-1（Quinine oxidoreductase-1，NQO1）mRNA的表達(dá)顯著降低（P<0.01），長(zhǎng)期TP處理后上述指標(biāo)表達(dá)明顯增加（P<0.01），但未達(dá)到

8、6月齡組大鼠水平（P<0.01）。
　　4免疫印跡檢測(cè)結(jié)果
　　免疫印跡檢測(cè)結(jié)果顯示，與6月齡大鼠相比，老年24月齡大鼠腎臟Nrf2、HO-1和NQO1蛋白的表達(dá)顯著降低（P<0.01），長(zhǎng)期TP處理后上述蛋白表達(dá)明顯增加（P<0.01），但未達(dá)到6月齡組大鼠水平（P<0.01）。
　　5免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)結(jié)果
　　免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，與6月齡大鼠相比，老年24月齡大鼠腎臟NQO1的表達(dá)顯著降低（P<0.01