己酮可可堿通過激活Nrf2-ARE信號通路改善老年大鼠肝臟功能.pdf

1、衰老的肝臟通常伴有形態(tài)改變以及由于脂類堆積、脂肪變性和肝纖維化等因素引起的肝損傷。研究表明，氧化應(yīng)激是衰老引起器官和細(xì)胞功能下降的因素之一。氧化應(yīng)激損傷生物大分子，減少蛋白質(zhì)的合成，增加細(xì)胞凋亡信號傳導(dǎo)，促進(jìn)蛋白質(zhì)的降解。所以，抗氧化應(yīng)激可能對衰老引起的肝損傷具有一定的改善防御作用。核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）可通過抗氧化反應(yīng)元件（ARE）誘導(dǎo)一系列的II相解毒酶基因。激活的Nrf2能夠上調(diào)多種II相解毒酶，如血紅素加氧酶-1（HO

2、-1）和NAD（P）H:醌氧化還原酶1（NQO1）等，這些Nrf2依賴的基因產(chǎn)物能夠保護(hù)細(xì)胞氧化或外源性損傷。因此，Nrf2-ARE途徑是機(jī)體重要的抗氧化防御系統(tǒng)之一，激活Nrf2-ARE途徑可能對機(jī)體具有保護(hù)作用。研究顯示，己酮可可堿（PTX）作為一個(gè)非特異性磷酸二酯酶抑制劑，是各種神經(jīng)遞質(zhì)的調(diào)節(jié)劑。近年來研究顯示PTX也具有抗氧化應(yīng)激作用。然而，PTX是否能夠通過激活肝臟Nrf2-ARE途徑，對衰老的肝細(xì)胞起到抗氧化應(yīng)激的保護(hù)作用，

3、目前尚不清楚。
　　目的：探討長期PTX處理對老年大鼠肝臟形態(tài)結(jié)構(gòu)和肝功能的影響及Nrf2-ARE抗氧化應(yīng)激途徑參與的機(jī)制。
　　方法：成年雄性SD大鼠共30只隨機(jī)分成3組。6月齡組（6Mon， n=10），24月齡組（24Mon， n=10）和24月齡腹腔己酮可可堿處理組（24Mon-PTX，n=10）。24Mon-PTX組大鼠在大鼠21月齡時(shí)腹腔注射己酮可可堿，劑量50mg/kg（0.9％生理鹽水溶液），每日1次，共計(jì)給

4、藥12周（84天）。6Mon組和24Mon組大鼠同時(shí)只腹腔注射給予0.9%生理鹽水溶液。每組各5只大鼠用于HE染色和免疫組織化學(xué)染色，收集靜脈血用于肝功能指標(biāo)測定，另外5只大鼠用于氧化應(yīng)激參數(shù)、實(shí)時(shí)定量PCR和免疫印跡檢測。
　　結(jié)果：
　　1、 HE染色結(jié)果
　　6月齡大鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰完整，老年24月齡大鼠肝細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)模糊、肝細(xì)胞肥大、數(shù)目減少、結(jié)締組織增生，長期PTX處理后上述形態(tài)變化均顯著改善。
　　2

5、、肝功能檢測結(jié)果
　　與6月齡大鼠相比，老年24月齡大鼠血液谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）（P<0.01）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）（P<0.01）和總膽紅素（TBiL）（P<0.01）的含量顯著增加，白蛋白（ALb）的含量顯著降低（P<0.01），長期PTX處理后上述指標(biāo)明顯改善（P<0.01），但未達(dá)到6月齡組大鼠水平（P<0.01）。
　　3、氧化應(yīng)激參數(shù)結(jié)果
　　與6月齡大鼠相比，老年24月齡大鼠肝臟MDA水平顯著升高（P<

6、0.01），GSH水平顯著降低（P<0.01），長期TPX處理后MDA水平顯著降低（P<0.01），GSH水平顯著升高（P<0.01），但未達(dá)到6月齡組大鼠水平（P<0.01）。
　　4、實(shí)時(shí)定量PCR檢測結(jié)果
　　與6月齡大鼠相比，老年24月齡大鼠肝臟Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA和NQO1 mRNA的表達(dá)顯著降低（P<0.01），長期PTX處理后上述指標(biāo)表達(dá)明顯增加（P<0.01），但未達(dá)到6月齡組大鼠水平（P<

7、0.01）。
　　5、免疫印跡檢測結(jié)果
　　與6月齡大鼠相比，老年24月齡大鼠肝臟Nrf2、HO-1和NQO1蛋白的表達(dá)顯著降低（P<0.01），長期PTX處理后上述蛋白表達(dá)明顯增加（P<0.01），但未達(dá)到6月齡組大鼠水平（P<0.01）。
　　6、免疫細(xì)胞化學(xué)檢測結(jié)果
　　與6月齡大鼠相比，老年24月齡大鼠肝臟Nrf2、HO-1和NQO1蛋白的平均光密度值（AOD）顯著降低（P<0.01），長期PTX處理后上