地佐辛對(duì)糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角NMDA-2B受體表達(dá)的影響.pdf

1、目的：糖尿病周圍神經(jīng)病變(diabetic peripheral neuropathy，DPN)疼痛屬于神經(jīng)病理性疼痛(neuropathic pain，NP)的一種類型，DPN是糖尿病常見(jiàn)的并發(fā)癥之一，在糖尿病患者中的發(fā)病率約為7.5％-24％。DPN的發(fā)病機(jī)制是非常復(fù)雜的，中樞敏化在DPN的產(chǎn)生和維持中起到了重要的作用，而興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸及其受體NMDA參與了中樞敏化的發(fā)生。NMDA-2B作為NMDA受體的一個(gè)亞基，對(duì)傷害性信號(hào)

2、的傳遞尤其重要，因此，近年來(lái)的對(duì)NMDA受體的研究重點(diǎn)放在NMDA-2B亞基上。
　　地佐辛作為新型人工合成強(qiáng)效的混合型阿片受體激動(dòng)-拮抗劑，其特點(diǎn)是鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)而不良反應(yīng)低，已在臨床廣泛應(yīng)用。研究發(fā)現(xiàn)弱阿片受體激動(dòng)劑曲馬多對(duì)DPN疼痛治療是有效的，而地佐辛對(duì)DPN的療效目前并不十分清楚，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)腹腔注射鏈尿佐菌素(STZ)，制備糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型，然后給予地佐辛進(jìn)行干預(yù)治療。通過(guò)觀察正常組(Normal組)、糖尿病神經(jīng)

3、病理性疼痛組(Control組)以及糖尿病神經(jīng)病理性疼痛模型制備成功后地佐辛干預(yù)組(Dezocine組)三組大鼠的體重、空腹血糖和50％縮足反應(yīng)閾值(PWT)的變化，采用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)以及RT-PCR技術(shù)，比較正常大鼠、糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠以及地佐辛干預(yù)的糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠的脊髓背角NMDA-2B受體的表達(dá)變化，從而探討地佐辛對(duì)糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠疼痛的影響及其可能的作用機(jī)制。
　　方法：健康成年雄性SD大鼠8

4、0只，體重130g～150g，由河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。模型的制備：隨機(jī)選擇60只大鼠腹腔注射STZ(50mg/kg)，注射STZ一周以后，有45只大鼠的空腹血糖>16.7mol/L(成功率為75％)，達(dá)到合格的標(biāo)準(zhǔn)。注射STZ兩周后，用von Frey Hairs測(cè)定實(shí)驗(yàn)大鼠的PWT，PWT小于4g為合格的神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型。剩余的20只大鼠作為正常對(duì)照大鼠組，用同等體積的生理鹽水代替STZ腹腔注射。
　　取糖尿病神經(jīng)

5、病理性疼痛大鼠36只，隨機(jī)分為2組，每組18只：一組為地佐辛組(Dezocine組)，于注射STZ后第2周開(kāi)始大鼠大腿外側(cè)肌肉注射地佐辛2.52mg/kg，每日一次，連續(xù)肌肉注射1周；一組為糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠組(Control組)，用同等體積的生理鹽水代替地佐辛，方法同前；取正常大鼠18組，作為正常組(Normal組)，用同等體積的生理鹽水代替地佐辛，方法同前。分別于注射STZ前(T0)、注射后第2周(T1)、第3周(T2)、第5

6、周(T3)、第7周(T4)5個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)量各組大鼠的體重、空腹血糖、PWT，于T2、T3、T4時(shí)間點(diǎn)三組分別隨機(jī)抽取6只大鼠取材。其中3只大鼠用于免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，麻醉后用4％的多聚甲醛液灌流固定后，取大鼠胸腰段膨大處的脊髓標(biāo)本制作成蠟塊，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，測(cè)定大鼠脊髓背角NMDA-2B受體的免疫陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞數(shù)；另外3只大鼠麻醉后快速在提取大鼠胸腰段膨大處脊髓組織，利用PT-PCR技術(shù)半定量測(cè)定NMDA-2B受體的mRNA含量。<

7、br>　　采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，組內(nèi)比較采用單因素方差分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.三組大鼠在體重、空腹血糖、50％縮足反應(yīng)閾值方面的變化比較：注射STZ前，三組大鼠體重、空腹血糖、PWT差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；注射STZ后，Dezocine組和Control組大鼠體重顯著降低、空腹血糖明顯升高、PWT顯著降低(P<0

8、.05)。注射地佐辛后，與Control組相比，地佐辛組大鼠PWT在T2時(shí)間點(diǎn)顯著升高(P<0.05)，在T3、T4時(shí)間點(diǎn)無(wú)明顯差異(P>0.05)；Control組和Dezocine組兩組大鼠的體重、空腹血糖在各時(shí)間點(diǎn)均無(wú)明顯差異(P>0.05)。
　　2.三組大鼠脊髓背角NMDA-2B受體的表達(dá)變化比較：與Normal組相比，Dezocine組和Control組兩組大鼠NMDA-2B受體免疫陽(yáng)性神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量、mRNA含量在T

9、2、T3、T4時(shí)間點(diǎn)顯著升高(P<0.05)，與Control組大鼠相比，Dezocine組大鼠NMDA-2B受體免疫陽(yáng)性神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量、mRNA含量在T2時(shí)間點(diǎn)顯著降低(P<0.05)，在T3、T4差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在Dezocine組內(nèi)NMDA-2B受體免疫陽(yáng)性神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量、mRNA含量T3時(shí)間點(diǎn)與T2比較顯著升高(P<0.05)。
　　結(jié)論：地佐辛可以有效緩解糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠的病理性痛；地佐辛可以抑