神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓APC-Cdh1的表達(dá)變化.pdf

1、目的：
　　建立大鼠神經(jīng)病理性疼痛模型并檢測(cè)大鼠脊髓APC-Cdh1的表達(dá)情況,從而探討其在神經(jīng)病理性疼痛中樞敏化中的作用,為神經(jīng)病理性疼痛的治療提供新的方向。
　　方法：
　　成年雄性SD大鼠54只,體重180-220g,隨機(jī)分為手術(shù)組(SNL組)、假手術(shù)組(Sham組)、空白組(Na?ve組),每組18只。SNL組沿L4-S1脊柱中線作一縱行切口,切除L5-L6關(guān)節(jié)突關(guān)節(jié)和L6橫突,游離L5神經(jīng)周圍組織,在其遠(yuǎn)端緊

2、緊結(jié)扎并剪斷。Sham組除了不結(jié)扎剪斷L5神經(jīng)外,其余均同SNL組。Na?ve組則不作任何處理。
　　于術(shù)前3、1天,術(shù)后2、3、4、5、6、7天各時(shí)間點(diǎn)用vonFrey細(xì)絲測(cè)定大鼠左后足50％機(jī)械刺激縮足閾值。于術(shù)后第7天測(cè)定完機(jī)械痛閾后,將各組大鼠處死,取脊髓腰膨大。每組取6只采用鏈霉親和素-生物素復(fù)合物(streptavidin-biotincomplex,SABC)法檢測(cè)脊髓背角GFAP和c-Fos蛋白的表達(dá);每組取6只大

3、鼠采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)脊髓內(nèi)Cdh1的mRNA含量;每組取6只大鼠采用Wsternblot檢測(cè)脊髓內(nèi)Cdh1及其相關(guān)蛋白的表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠50%機(jī)械刺激縮足閾值變化:三組大鼠手術(shù)前基礎(chǔ)50%機(jī)械刺激縮足閾值無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。SNL組大鼠左后足50%機(jī)械刺激縮足閾值于術(shù)后第二天即開始顯著下降(P<0.05),一直持續(xù)到術(shù)后第七天,而Sham組和Na?ve組大鼠的50%機(jī)械刺激縮足閾值則沒有明

4、顯的變化。
　　2.SABC法檢測(cè)脊髓背角GFAP和c-Fos蛋白的表達(dá):術(shù)后第7天免疫組織化學(xué)顯示SNL組大鼠左側(cè)脊髓背角的GFAP和c-Fos蛋白表達(dá)含量明顯增高,與Sham組和Na?ve組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Cdh1的mRNA表達(dá):與Sham組與Na?ve組相比,SNL組大鼠于術(shù)后第7天脊髓腰膨大內(nèi)Cdh1mRNA的含量下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

5、>　　4.Westernblot檢測(cè)Cdh1以及Cdh1相關(guān)蛋白APC2、Skp2的表達(dá)水平:與Sham組和Na?ve組相比,術(shù)后第7天SNL組大鼠脊髓腰膨大內(nèi)Cdh1的表達(dá)水平下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而各組間APC2和Skp2的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　將大鼠L5神經(jīng)結(jié)扎并剪斷,可以成功地制備神經(jīng)病理性疼痛模型,并能誘導(dǎo)脊髓背角GFAP和c-Fos蛋白的表達(dá)。神經(jīng)病理性疼痛模型大鼠