神經(jīng)病理性疼痛大鼠海馬NF-κB TNF-α及NOS的表達變化.pdf

1、目的：
　　 觀察大鼠海馬中核因子NF-κB，腫瘤壞死因子TNF-α，一氧化氮合酶iNOS和nNOS在慢性坐骨神經(jīng)擠壓性損傷疼痛模型中表達的變化規(guī)律以及它們之間的相互關系。以探討NF-κB信號轉(zhuǎn)導通路在慢性疼痛的發(fā)生與發(fā)展中的作用規(guī)律。
　　 方法：
　　 健康雄性Wistar大鼠70只，體重220～280g，隨機分為假手術組(sham組)和手術組(CCI組)(n=35)。采用Bennett和Xie創(chuàng)建的辦法，結

2、扎坐骨神經(jīng)建立大鼠的神經(jīng)病理性疼痛(CCI)模型。分別于CCI前1d、CCI后1d、4d、7d、14d、21d和28d測定機械痛閾和熱痛閾后處死并取出海馬組織，每個時間點5只。實時定量PCR法檢測大鼠海馬中因子NF-κB，TNF-α，iNOS和nNOS mRNA水平的變化。根據(jù)PCR的結果另取健康雄性wistar大鼠6只，每組3只，于CCI后7d處死大鼠，取海馬組織制作冰凍切片。采用免疫熒光的方法觀察NF-κB，TNF-α在海馬表達情況

3、。
　　 結果：
　　 1)機械痛閾和熱痛閾的變化 CCI組大鼠術側著地時間較健側明顯縮短，且右足蜷曲，跛行，有時出現(xiàn)舔舐，懸空等后肢保護(縮足)現(xiàn)象，而健側及假手術組均未出現(xiàn)縮足現(xiàn)象。CCI前1天各組痛閾比較差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與CCI前比較，CCI組術側機械性痛閾和熱痛閾在術后第1d開始出現(xiàn)下降(P<0.05)，術后7d機械痛閾下降達到最低(P<0.01)，術后4d熱痛閾下降達到最低(P<0.01)，以

4、后逐漸恢復，但至28d仍處于較低水平(P<0.05)；與slaam組比較，CCI組術側術后1～28d機械痛閾和熱痛閾下降(P<0.05)；兩組健側機械痛閾和熱痛閾組間及組內(nèi)比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　 2)蛋白的定性表達 CCI后第7d NF-κB及TNF-α表達最多。可見在CCI海馬的齒狀回NF-κB表達明顯增多，呈細顆粒狀。主要表現(xiàn)為陽性細胞數(shù)目增多，著色變深，且定位于神經(jīng)元核，TNF-α在海馬齒狀回神經(jīng)元

5、胞漿的表達也增加，但不如NF-κB表達明顯。
　　 3)mRNA水平的變化以術前1d組為參照，其各個指標mRNA的表達量均為1。NF-κB mRNA在正常大鼠海馬組織中呈低水平表達，當坐骨神經(jīng)結扎損傷后，其CCI組海馬組織中NF-κB mRNA的含量于損傷后1d開始增加，但并不明顯(P>0.05)，4d顯著增加(P<0.05)，7d達到高峰，與Sham組相比均有顯著性差異(P<0.05)，術后28d雖有所降低，但仍維持于較高水平

6、(P<0.05)。TNF-αmRNA的表達于傷后1d開始增強，于7d達到高峰，隨后迅速下降，CCI組4d、7d的TNF-α mRNA水平均高于Sham組(P<0.01)。與假手術組相比，nNOS mRNA的表達于傷后4d開始增強，而iNOS于傷后7d開始增強，都在21d達到高峰，28d仍維持于較高水平(P<0.05)。
　　 結論：
　　 CCI致大鼠海馬NF-κB活化，TNF-α，iNOS和11NOS的表達增加，NF-