益氣養(yǎng)陰化痰通絡中藥對糖尿病性脂肪肝大鼠肝臟的治療作用.pdf

1、目的:糖尿病性脂肪肝(Diabetic Fatty Liver,DFL)是指在糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)基礎上出現(xiàn)的肝細胞的脂肪變性,臨床上可將其歸屬于非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD)的范疇?！岸未驌簟睂W說認為在NAFLD發(fā)生過程中,胰島素抵抗(Insulin Resistance,IR)和脂代謝紊亂是第一次打擊,導致肝臟對多種損傷因素敏感;氧化

2、應激、脂質(zhì)過氧化及各種損傷因子是第二次打擊,導致肝臟進一步發(fā)生變性、炎癥、壞死及纖維化。二次打擊在DFL的發(fā)病過程中表現(xiàn)得尤為突出。本研究通過對SD大鼠采用高脂飲食聯(lián)合腹腔注射中劑量鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)的方法建立DFL模型,應用益氣養(yǎng)陰化痰通絡中藥復方對該模型進行干預,通過觀察實驗動物一般情況、肝指數(shù)、肝臟病理形態(tài)學、血清甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)的含量、肝組織丙二醛(MDA)

3、水平、肝組織總超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、血清脂聯(lián)素水平,肝組織脂聯(lián)素(Adiponectin)及其受體2(Adiponectin Receptor2,AdiR2)水平,探討益氣養(yǎng)陰化痰通絡中藥復方對DFL的治療作用及其可能的作用機制,為臨床上治療以氣陰兩虛痰瘀阻絡為基本病因病機的消渴提供實驗依據(jù)。
　　 方法:
　　 清潔級健康雄性SD大鼠75只,體重240～260g,適應性飼養(yǎng)1周后,按體重隨機分為正常組12只

4、、模型組18只、益氣養(yǎng)陰化痰通絡中藥低劑量組、中劑量組、高劑量組每組各15只。除正常組給予普通飼料喂養(yǎng)外,其余各組大鼠均給予高脂飼料喂養(yǎng)。喂養(yǎng)4周后,除正常組外,其余各組大鼠一次性腹腔注射STZ35mg·kg-1,正常組腹腔注射相當劑量枸櫞酸緩沖液,72小時后連續(xù)3次尾靜脈取血測血糖,以≥16.7mmol·L-1為DM模型造模成功標準。造模成功后,益氣養(yǎng)陰化痰通絡中藥低、中、高劑量組大鼠分別給予中藥5.29g·kg-1·d-1、10.5

5、8g·kg-1·d-1、21.16g·kg-1·d-1灌胃,正常組及模型組給予相當劑量的生理鹽水灌胃,每日一次,共8周。于用藥后第8周末,禁食12h,麻醉狀態(tài)下稱量體重,股動脈取血,分離血清,測定TG、TC、HDL,ELISA方法檢測血清.Adiponectin水平;摘取肝臟,稱量肝臟重量計算肝指數(shù),留取肝組織置于4％多聚甲醛固定液,光鏡下觀察各組大鼠肝臟病理形態(tài)學變化;留取肝組織液氮速凍后置-80℃低溫冰箱保存,用于檢測肝組織中MDA

6、含量、T-SOD活力,RT-PCR方法檢測肝臟組織中Adiponectin含量,Western blot方法檢測肝臟AdiR2的表達。
　　 結(jié)果:
　　 1：實驗大鼠的一般狀況實驗過程中除正常組外,其余四組均有死亡情況,其中模型組死亡4只,中藥高劑量組死亡2只,中、低劑量組死亡各1只,死亡原因可能與高血糖引起的酮癥酸中毒及各臟器功能紊亂有關。正常組大鼠體重呈進行性增長,飲食正常,反應敏捷,眼光有神,毛發(fā)有光澤,糞便呈麥

7、粒樣,尿量正常。其余各造模組大鼠腹腔注射STZ后,出現(xiàn)明顯的多飲多尿現(xiàn)象,并逐漸出現(xiàn)精神萎靡,反應遲鈍,眼光呆滯,毛發(fā)無光澤,糞便時而不成形。
　　 2：各組大鼠體重、肝重、肝指數(shù)(肝濕重/體重×100％)結(jié)果顯示:各組大鼠體重與肝濕重,與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組大鼠體重、肝濕重明顯升高(P≤0.05);與模型組相比,中藥各劑量組體重、肝濕重明顯降低(P＜0.05);各中藥治療組之間無顯著性差異(P＞0.05);

8、各組大鼠肝指數(shù),與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組大鼠肝指數(shù)明顯升高(P＜0.05);與模型組相比,中藥各劑量組肝指數(shù)明顯降低(P＜0.05);各中藥治療組之間無顯著性差異(P＞0.05)。提示,益氣養(yǎng)陰化痰通絡中藥可明顯降低DFL大鼠體重、肝濕重及肝指數(shù),減輕肝臟的脂肪變性。
　　 3：各組大鼠肝臟病理形態(tài)學改變正常組大鼠肝小葉完整,界限清晰,肝細胞圍繞中央靜脈呈放射狀排列,其中央有大而圓的細胞核,細胞質(zhì)均勻,偶可見小

9、脂滴,肝竇清晰可見,肝索排列整齊;模型組大鼠肝小葉界限不清,肝細胞脂肪變性腫脹,肝細胞內(nèi)含有大小不等的脂肪滴,將肝細胞核擠向一側(cè),肝竇間隙明顯變窄,局部可見纖維組織增生,延伸向肝小葉內(nèi)部,肝索排列紊亂;益氣養(yǎng)陰化痰通絡中藥各治療組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,肝竇輕度擴張,結(jié)構(gòu)較正常,部分肝細胞脂肪變性,肝細胞內(nèi)脂肪滴較模型組明顯減少,多以小脂滴存在,肝索排列較整齊。提示,益氣養(yǎng)陰化痰通絡中藥可改善DFL大鼠肝臟脂肪變性。
　　 4：各組大鼠

10、血清TG、TC、HDL含量各組大鼠血清TG含量結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組大鼠血清TG明顯升高(P＜0.05);與模型組相比,中藥各劑量組血清TG明顯降低(P＜0.05);中劑量組與高、低劑量相比明顯降低(P＜0.05),中藥高劑量組和低劑量組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 各組大鼠血清TC含量結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組大鼠血清TC明顯升高(P＜0.05);與模型組相比

11、,中藥各組血清TC明顯降低(P＜0.05);中藥各組間比較,中劑量組與高、低劑量相比明顯降低(P＜0.05),中藥高劑量組和低劑量組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 各組大鼠血清HDL,含量結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組大鼠血清HDL明顯降低(P＜0.05);與模型組相比,中藥各組血清HDL明顯升高(P＜0.05);中藥各組間比較,中劑量組與高、低劑量相比明顯升高(P＜0.05),中藥高劑量組和低劑

12、量組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 以上結(jié)果提示,益氣養(yǎng)陰化痰通絡中藥可明顯降低DFL大鼠血清TG、TC含量,升高血清HDL含量,此可能為其治療DFL的機制之一。
　　 5：各組大鼠肝臟組織MDA含量及T-SOD活力各組大鼠肝組織MDA含量結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組明顯升高(P＜0.05);與模型組相比,中藥各劑量組明顯降低(P＜0.05);中藥各組間比較,高劑量組與低、中劑量相比明顯

13、升高(P＜0.05),中藥低劑量組和中劑量組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 各組大鼠肝組織T-SOD活力結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組明顯降低(P＜0.05);與模型組相比,中藥各劑量組明顯升高(P＜0.05);中藥各劑量組之間比較,高劑量組與低、中劑量相比明顯降低(P＜0.05),中藥低劑量組和中劑量組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 提示,益氣養(yǎng)陰化痰通絡中藥可明顯降低DFL大

14、鼠肝臟組織中MDA含量并且提高T-SOD活力,明顯改善DFL大鼠肝臟抗氧化能力,此可能為其治療DFL的機制之一。
　　 6：各組大鼠血清Adiponectin、肝組織Adiponectin及AdiR2的水平各組大鼠血清Adiponectin水平比較,結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組明顯降低(P＜0.05);與模型組相比,中藥各劑量組明顯升高(P＜0.05);中藥各組間比較,高劑量組與低、中劑量相比明顯降低(P

15、＜0.05),中藥低劑量組和中劑量組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 大鼠肝臟Adiponectin水平比較,正常組、模型組及中藥各治療組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 各組大鼠肝組織AdiR2水平比較,結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組、中藥低、中、高劑量組明顯降低(P＜0.05);與模型組相比,中藥各劑量組明顯升高(P＜0.05);中藥各組間比較,中劑量組較高、低劑量明顯升高(P＜0.05),中藥高劑量

16、組和低劑量組之間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 以上結(jié)果顯示,益氣養(yǎng)陰化痰通絡中藥可明顯提高DFL大鼠血清Adiponectin水平和肝臟AdiR2水平,但對肝臟Adiponectin的水平影響不明顯,提示本方對DFL的治療作用可能與提高DFL大鼠血清Adiponectin水平和肝臟AdiR2水平有關,而與其對肝臟Adiponectin水平的影響無關。
　　 結(jié)論:
　　 1：益氣養(yǎng)陰化痰通絡中藥可明顯改善

17、DFL大鼠肝臟脂肪變性,降低肝指數(shù),對于DFL有良好的治療作用。
　　 2：益氣養(yǎng)陰化痰通絡中藥可明顯降低DFL大鼠的血清TG及TC,升高血清HDL含量,提示其對DFL的治療作用與調(diào)節(jié)血脂有關。
　　 3：益氣養(yǎng)陰化痰通絡中藥可明顯提高DFL大鼠肝臟抗氧化能力,延緩“二次打擊”學說中的第二次打擊,即脂質(zhì)過氧化,起到防止肝臟進一步變性、壞死及纖維化的作用,此可能為本中藥復方治療DFL的作用機制之一。
　　 4：益氣