三甲基氯化錫對大鼠消化道收縮機制的影響.pdf

1、甲基硫醇錫是目前應(yīng)用最廣的一種熱穩(wěn)定劑，廣泛存在于PVC塑料制品中。三甲基氯化錫（Trimethyltin chloride, TMT）是甲基硫醇錫熱穩(wěn)定劑合成過程中產(chǎn)生的一種劇毒副產(chǎn)物，無色有腐草氣味的白色晶體，遇熱易揮發(fā)，易溶于水和脂，能經(jīng)呼吸道、皮膚和消化道吸收引起中毒反應(yīng)的發(fā)生。中毒后患者會產(chǎn)生激動、攻擊行為、癲癇、腹瀉及低血鉀癥等多種臨床表現(xiàn)，重癥者意識模糊、昏迷甚至死亡。TM T可以隨著PVC制品的生產(chǎn)流通遷移至飲用水或食品

2、中，嚴重危害人們的健康。
　　目的：由于日常生活中TMT主要是通過消化道途徑引起中毒，導(dǎo)致腹痛腹瀉等癥狀。因此，本研究希望從整體、組織和細胞三個層面來研究TMT對大鼠消化道收縮的影響，探索TMT對消化道收縮作用的信號通路和分子機制，臨床進一步預(yù)防和診斷提供理論參考。
　　方法：24只無特定病原體級SD大鼠，180-220g，雌雄不拘，分為對照組和低濃度TMT組、中濃度TMT組、高濃度TMT組，在TMT中毒大鼠模型中進行活性炭

3、灌胃法檢測各組大鼠腸道推進率。28只無特定病原體級 SD大鼠，180-220g，雌雄不拘，每只取遠端結(jié)腸組織1-3段進行實驗。觀察記錄 TM T對大鼠正常結(jié)腸組織（ n=11）和去上皮結(jié)腸組織（ n=10）自主收縮的影響；觀察記錄使用Atropine（n=10）、U73122（n=8）、2-APB（n=9）、Tg（n=7）、SKF96365（n=5）、N ife d ip ine（ n=4）等不同藥物預(yù)孵育后TM T對結(jié)腸組織作用的影響

4、。原代培養(yǎng)和鑒定大鼠結(jié)腸平滑肌細胞，CCK-8法檢測TMT細胞毒性。用熒光染料Fluo3–AM熒光標記法測結(jié)腸平滑肌細胞胞漿內(nèi)游離鈣，用熒光倒置顯微鏡檢測TMT對胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)的影響。
　　結(jié)果：TMT中毒的大鼠模型中，當TMT濃度為LD50（14.7mg/kg）時大鼠消化道活性炭推進長度明顯高于正常對照組（n=6，P＜0.01），表明TM T可增強大鼠腸道推進率。TMT可引起離體結(jié)腸組織的收縮增強并呈濃度依賴（ n=11），但非受上

5、皮或神經(jīng)調(diào)控。M受體阻滯劑 atropine(1μM， n=10)、PLC抑制劑U73122(10μM， n=8)和抑制劑2-APB(100μM， n=9)均可以抑制TM T刺激的結(jié)腸自主收縮增強（P＜0.01）。無鈣KH液中TMT仍然可以刺激結(jié)腸平滑肌收縮增強，但其刺激作用與正常KH液中相比明顯降低（n=4，P＜0.01）；加入CaCl2(0.1 mM、1 mM，n=4)后TMT的刺激作用隨胞外Ca2+濃度的升高逐漸恢復(fù)。應(yīng)用Tg(1

6、μM，n=7)不可逆的耗盡胞內(nèi)鈣庫亦可以抑制 TMT的刺激作用，且加入CaCl2(1 mM)后 TM T的刺激作用仍不能恢復(fù)（ P＜0.01）。L型鈣離子通道阻滯劑nifedipine(10μM，n=4)和TRPC阻滯劑SKF96365(10μM，n=5)預(yù)處理后，TMT的刺激作用也受到了抑制。此外，TM T對大鼠結(jié)腸平滑肌細胞具有一定的細胞毒性，會影響細胞的增殖和活力。熒光倒置顯微鏡檢測TMT處理細胞后可見熒光強度出現(xiàn)緩慢上升，表明胞

7、內(nèi)Ca2+濃度逐漸升高。
　　結(jié)論：
　　1. TM T可以增強SD大鼠腸道推進率。
　　2. TM T可以增強SD大鼠結(jié)腸的收縮，且作用效果呈濃度依賴性。
　　3. TMT可能通過“M3-PLC-IP3-Ca2+庫”通路刺激胞內(nèi)鈣庫釋放Ca2+，進一步開放膜上鈣通道（如，L型鈣通道和TRPC鈣通道）以增加胞外Ca2+內(nèi)流，從而使結(jié)腸自主收縮增強。
　　4. TMT可使原代培養(yǎng)的SD大鼠結(jié)腸平滑肌細胞內(nèi)Ca