三甲基氯化錫引起低鉀血癥的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究三甲基氯化錫(Trimethyltin Chloride，TMT)對(duì)腎氫鉀ATP酶(H<'+>-K<'+>-ATP ase，HKA)活性的抑制作用，闡明TMT中毒致低鉀血癥的確切機(jī)制。 方法：(1)斷頭處死大鼠，取腎，制備腎組織勻漿(10％)。按酶活性測(cè)定試劑盒的方法，觀察腎組織勻漿濃度，反應(yīng)時(shí)間，哇巴因及sch28080對(duì)酶活性的影響，確定最佳實(shí)驗(yàn)條件。在反應(yīng)體系中，加入0，5，25，125和625μM的TMT，測(cè)定

2、腎HKA的活性，用腎臟HKA酶特異抑制劑Sch-28080作為質(zhì)控。(2)取SD大鼠24只，隨機(jī)分為4組，分別腹腔注射TMT 0、10、21.5、46.4mg/kg 1小時(shí)后經(jīng)心臟采集動(dòng)脈血進(jìn)行血?dú)夥治?；其后斷頭處死動(dòng)物，取血漿測(cè)定K<'+>、Na<'+>、Cl<'->、GLU、CK、CK-MB、LDH、HBDH、AST、ALT；取一側(cè)腎臟測(cè)定HKA和鈉鉀ATP酶(NKA)；另一側(cè)腎臟進(jìn)行HKA免疫熒光原位觀察和組織病理學(xué)觀察。(3)取

3、SD大鼠36只，隨機(jī)分為6個(gè)組，其中3個(gè)實(shí)驗(yàn)組，分別經(jīng)腹腔注射TMT(10 mg/kg)，另3組為對(duì)照組，分別給予生理鹽水(10ml/kg)。分別于染毒后第0、2、5天進(jìn)行24小時(shí)代謝實(shí)驗(yàn)，收集24小時(shí)尿液，檢測(cè)尿中K<'+>、Na<'+>、Cl<'->、GLU、Cr；其后按(2)的方法處理動(dòng)物，用多元相關(guān)分析法分析血中K<'+>、pH、尿K+、pH與腎HKA活性的相關(guān)關(guān)系影響。(4)取SD大鼠腎小管進(jìn)行上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)，角蛋白免疫熒光

4、法鑒定上皮細(xì)胞，免疫熒光法觀察HKA在集合管細(xì)胞上的表達(dá)情況，用膜片鉗全細(xì)胞記錄觀察TMT對(duì)集合管細(xì)胞鉀通道的影響，用激光共聚焦方法觀察TMT對(duì)集合管細(xì)胞內(nèi)pH的影響。 結(jié)果：在HKA活性測(cè)定的反應(yīng)體系中，加入不同濃度的TMT，腎組織勻漿中HKA活性從18.33降到13.07(μmolPi/mgpro/h)(P<0.01)，與Sch28080(100μM)的抑制作用一致，并呈劑量反應(yīng)關(guān)系(R=0.790，P<0.01)。

5、 TMT10、21.5和46.4mg/kg均可使大鼠腎HKA活性、血鉀和血pH顯著下降(分別為，P<0.01，P<0.01租P<0.05)，HKA活性與血鉀血pH水平呈正相關(guān)，R值分別為0.631(P<0.05)和0.778(P<0.01)。TMT10mg/kg染毒后1、3、6天大鼠均出現(xiàn)血鉀下降、血pH降低，尿排鉀持續(xù)增多，尿pH值明顯升高(P<0.01)；腎HKA的活性顯著下降(P<0.01)，且隨染毒時(shí)間呈不斷下降趨勢(shì)；HKA活性