不同白僵菌菌株的生物學(xué)特性比較及HFW-05菌株田間種群動(dòng)態(tài).pdf

1、球孢白僵菌(Beauveriabassiana)是目前國內(nèi)外應(yīng)用最廣泛的昆蟲病原真菌之一,可侵染15個(gè)目149個(gè)科的700多種昆蟲。本研究以在不同寄主中分離純化得到的15株球孢白僵菌為供試菌株,明確了15株供試菌株的生物學(xué)特性、孢子萌發(fā)特性、種間分類和酯酶型特征;通過RAPD方法比較研究了15株菌的分子遺傳差異性;并研究了白僵菌HFW-05菌株在田間土壤的宿存能力,及其在田間作物番茄、黃瓜和洋白菜的葉片表面和葉肉中的定殖情況,及其對原始

2、微生物細(xì)菌、放線菌種群的影響。
　　 為了明確不同白僵菌菌株的生物學(xué)特征和其屬間地位,對15株白僵菌菌株的ITS片段進(jìn)行測序分析,并對這些菌株的菌落生長速率、產(chǎn)孢量、孢子萌發(fā)率、單芽管孢子萌發(fā)比例、單芽管平均長度和長芽管平均長度等多項(xiàng)生物學(xué)指標(biāo)進(jìn)行測定。序列分析表明它們均為球孢白僵菌,各菌株的菌落生長速率無顯著差異;單芽管孢子萌發(fā)比例變化范圍11.91-96.03％;單芽管平均長度和雙芽管平均長度分別為6.28-21.43μm和

3、10.338-19.902μm;各菌株間孢子萌發(fā)率差異很大,變化范圍22.09%-86.32%。對菌株的培養(yǎng)特性(孢子萌發(fā)率、產(chǎn)孢量和菌落生長速率)與孢子萌發(fā)特性(單芽管孢子萌發(fā)比例、芽管總平均長度和芽管整齊度)這兩個(gè)主因子進(jìn)行典型相關(guān)分析,兩性狀集團(tuán)總體相關(guān)不顯著(p=0.341),而孢子萌發(fā)率與單芽管孢子萌發(fā)比例相關(guān)顯著,菌落生長速率與芽管總平均長度呈顯著差異。
　　 為了研究15株白僵菌的遺傳多態(tài)性,利用酯酶同工酶酶譜和R

4、APD技術(shù)對這這些菌株的遺傳多樣性進(jìn)行了研究。酯酶同工酶結(jié)果表明,15株菌為球孢白僵菌種下的不同酯酶型,菌株間的相似性在在0.125-1.000之間,在相似性系數(shù)0.7位置上可以分為10個(gè)組群。利用RAPD-PCR技術(shù),從160個(gè)RAPD引物中篩選出多態(tài)性高、條帶清晰的47個(gè)引物,共得到497條RAPD條帶,片段大小在100bp-2200bp之間,其中多態(tài)性條帶數(shù)為416,多態(tài)性為83.70%,菌株間的相似度范圍在0.4848-0.88

5、48之間,在相似性系數(shù)0.7位置上可以分為6個(gè)組群,從相似性聚類圖上,菌株的遺傳多樣性與寄主來源未表現(xiàn)出相關(guān)性,而其與地理來源的相關(guān)性也沒有很明確的表現(xiàn)出來。這一結(jié)論與酯酶同工酶酶譜相同。
　　 為了研究HFW-05菌株在田間植株和土壤中的宿存狀態(tài),分別采用葉面噴菌和灌根方法對HFW-05在田間的宿存狀態(tài)進(jìn)行測定。結(jié)果表明,HFW-05在番茄葉片表面和葉肉中均可以定殖,最終定殖量分別為29.25±6.50×105cfu/g鮮葉和

6、9.2±1.06×103cfu/g鮮葉,洋白菜葉片上分別為21.45±2.30×105cfu/g鮮葉和5.94±1.15×103cfu/g鮮葉。在土壤定殖研究中,HFW-05在滅菌土的最終定殖量為53.10±5.16×106cfu/g±,非滅菌土為28.04±5.34×106cfu/g±,其在滅菌土中的定殖能力高于非滅菌土,且發(fā)現(xiàn)白僵菌有利于土壤中細(xì)菌放線菌微生物種群的生存和繁殖。結(jié)果表明,球孢白僵菌HFW-05菌株在田間的作物葉片上和