水稻紋枯病菌原生質體制備及再生菌株的生物學特性研究.pdf

1、水稻紋枯病是水稻上的三大病害之一，嚴重的影響了水稻的產量和質量。引起水稻紋枯病害的病原菌包括多核的瓜亡革菌（Thanatephorus cucumeris）和雙核的稻角擔菌（Ceratobasidium oryzae-sativae），它們的無性世代分別稱為茄絲核菌（Rhizoctonia solani Kühm）和稻絲核菌（Rhizoctonia oryzae-sativae）。病菌難以產生擔孢子、不產生無性孢子以及缺乏高效的遺傳轉化

2、系統(tǒng)等因素導致水稻紋枯病菌的分子生物學特性研究相對滯后，甚至難以開展。本論文以瓜亡革菌菌株WH-1，稻角擔菌菌株WH-87及含有稻角擔菌和瓜亡革菌兩種真菌rDNA的菌株RCOL-1為試驗材料，進行了原生質體的制備、再生以及原生質體再生后代生物學特性分析，旨在探索水稻紋枯病菌原生質體制備和再生規(guī)律，為建立水稻紋枯病菌遺傳轉化體系提供轉化材料。
　　 對影響水原生質體制備的酶、酶濃度、酶解時間、菌齡及培養(yǎng)條件等因素進行了研究，試驗結

3、果如下：供試菌株WH-1原生質體制備的最佳條件是裂解酶（Lysing Enzymes，Sigma）濃度1.5％，菌齡是將菌絲于28℃條件下，120 rpm，PDB中搖培15 h，裂解酶反應時間是150 min，純凈的原生質體稀釋后涂布在RM上于28℃條件培養(yǎng)，再生率為65％。供試菌株WH-87和RCOL原生質體制備的最佳條件是：裂解酶濃度為2％，菌齡是將菌絲于28℃條件下，120 rpm，PDB中搖培24 h，酶解時間是150 min，

4、純凈的原生質體稀釋后涂布在RaM上于28℃條件培養(yǎng)，再生率為32.6％和2％。
　　 以菌株WH-1為出發(fā)菌株，獲得了40株原生質體再生菌株。與出發(fā)菌株的菌落形態(tài)相比，這些再生菌株在菌落形態(tài)和核型上沒有顯著差異；有27個再生菌株的生長速度與出發(fā)菌株相比顯著增快；原生質體再生菌株在致病力上也存在顯著性差異。
　　 以菌株WH-87為出發(fā)菌株，獲得了140個原生質體再生菌株。根據(jù)再生菌株的菌落形態(tài)差異，將這些再生菌株分為兩種

5、類型（類型Ⅰ和類型Ⅱ），類型Ⅰ與菌株WH-87類似。對50個再生菌株進行生長速度測定，結果表明：Ⅰ類菌株生長速度高于出發(fā)菌株，Ⅱ類菌株生長速度顯著低于出發(fā)菌株，分別占全部原生質體再生菌株的88.6％和11.4％。它們的致病力存在顯著性差異。細胞核型沒有差異。
　　 以菌株RCOL為出發(fā)菌株，獲得的82個原生質體再生菌株。根據(jù)再生菌株的菌落形態(tài)差異，將這些再生菌株分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ種類型，分別占全部原生質體再生菌株的61.1％、13％