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1、樹(shù)枝狀高聚物聚酰胺-胺(Polyamidoamine, PAMAM)為近年來(lái)開(kāi)發(fā)的一類三維的高度支化的樹(shù)枝狀高分子,具有單一分散性,無(wú)免疫原性,細(xì)胞毒性較低,生物可降解等特性,作為藥物載體能夠增加藥物皮膚滲透系數(shù),延長(zhǎng)角膜滯留時(shí)間,從而增加藥物的生物利用度,課題組前期研究表明PAMAM 可以增加葛根素離體角膜滲透性。是一種頗具發(fā)展?jié)摿Φ男滦脱鄄克幬镙d體。
微滲析(microdialysis)技術(shù)是近年來(lái)開(kāi)發(fā)的一種以透析原理
2、為基礎(chǔ),在組織細(xì)胞間隙測(cè)定內(nèi)源性和外源性物質(zhì)的在體取樣技術(shù)。該技術(shù)具有大量實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型無(wú)可匹敵的優(yōu)點(diǎn)。例如,微滲析技術(shù)對(duì)動(dòng)物組織的損傷小;使得同時(shí)在同一動(dòng)物體內(nèi)監(jiān)測(cè)靶組織和血液藥物濃度成為可能;自身做對(duì)照,減少了實(shí)驗(yàn)誤差及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù);具有連續(xù)、不間斷取樣特性,真正做到了對(duì)組織中的藥物進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)等。已經(jīng)在藥代動(dòng)力學(xué)研究方面得到廣泛的應(yīng)用。
本論文以葛根素(Puerarin, PUE)為模型藥物,建立兔眼部微滲析模型,采用L
3、C-MS/MS 檢測(cè)方法,考察了不同代數(shù)的PAMAM對(duì)于PUE 眼部吸收的影響,為PAMAM 成為眼部藥物給藥載體提供依據(jù)。
一、建立了基于MAB/3 型探針的兔眼部微滲析模型,并對(duì)探針體內(nèi)外回收率進(jìn)行考察,探針體內(nèi)外回收率分別為(16.25±1.13)%、(30.16±0.49)%。建立了眼部房水中PUE 測(cè)定的LC-MS/MS 檢測(cè)方法,優(yōu)化的質(zhì)譜條件為ESi離子源;負(fù)離子掃描模式,選擇離子監(jiān)測(cè)方式;多反應(yīng)檢測(cè);色譜柱
4、:C18,(Phenomenex Luna,150mm×2.1mm I.d.,5 μm);流動(dòng)相:乙腈-0.2 mmol·L-1醋酸銨水溶液(40:60);流速:0.2 Ml·min-1;運(yùn)行時(shí)間:5min;噴霧電壓:3.0Kv;毛細(xì)管溫度:350℃;鞘氣壓:30kPa;輔助氣流速:5 arb;碰撞電壓:25 Ev;m/z 415.0摯瑬敳獩 295.0(葛根素),m/z 449.1摯瑬敳獩 285.0(落新婦苷,內(nèi)標(biāo))。使用Xcali
5、burversion 1.4.1軟件處理數(shù)據(jù)。葛根素在兔房水滲析液中標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍為2~1000ng·Ml-1,最低定量限為2 ng·Ml-1,方法提取回收率為79%~86%,低、中、高三個(gè)濃度(2,50,1000ng·Ml-1)的日內(nèi)和日間精密度(RSD)均小于10%。方法專屬性好,靈敏度高,因此本方法滿足滲析液樣品測(cè)定要求,可用于葛根素的眼部藥代動(dòng)力學(xué)研究。
二、采用建立的兔眼部微滲析模型,分別考察了PUE(1%,
6、w/v)及不同代數(shù)PAMAM (0.2%,w/v)與PUE 混合后的眼部藥物動(dòng)力學(xué)。結(jié)果表明G3.0,G4.0,G5.0PAMAM-PUE 混合組葛根素的藥-時(shí)曲線下面積分別為PUE組的2.3,3.5,2.1倍,峰濃度分別為PUE的1.5, 2.5和1.3倍,達(dá)峰時(shí)間也延長(zhǎng)。提示隨著PAMAM代數(shù)的增加,葛根素的房水峰濃度和相對(duì)生物利用度也明顯增高。但是G5.0PAMAM-PUE 混合組卻較G3.0,G4.0PAMAM-PUE 混合組低
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