表沒食子兒茶素沒食子酸酯對白介素-4誘導的小鼠M2型巨噬細胞標志性因子表達的影響.pdf

1、巨噬細胞是機體重要的免疫細胞，與炎癥、宿主防御、創(chuàng)傷修復等密切相關(guān)，多樣性和可塑性是其兩大特點。根據(jù)激活后的活化狀態(tài)和發(fā)揮功能的不同分為經(jīng)典激活型巨噬細胞(M1型)和替代激活型巨噬細胞(M2型)。M1型巨噬細胞由TLR配體和IFN-γ共同刺激產(chǎn)生，其代表的是一種促炎表型，能清除入侵病原體，促進Th1型免疫反應，產(chǎn)生IL-1、IL-6、IL-12、TNF-α、iNOS等促炎因子。而M2型巨噬細胞是一種抗炎表型，參與機體眾多疾病的免疫及病理

2、生理過程，與病原微生物感染、腫瘤、超敏反應性疾病及創(chuàng)傷愈合等多種疾病有相關(guān)性，具有調(diào)控組織修復和重塑，促進Th2型免疫反應的功能;基于誘導劑和標志性分子表達的不同分為M2a、M2b、M2c和M2d，而M2a是典型的M2型巨噬細胞，由IL-4/IL-13刺激產(chǎn)生，分泌抵抗素樣分子α(Fizz-1)、精氨酸酶-1(Arg-1)、小鼠幾丁質(zhì)酶3類蛋白3(Ym-1)、IL-10等抗炎標志性因子。
　　目前研究已經(jīng)證實，表沒食子兒茶素-3-

3、沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate)是綠茶中最有效的抗氧化多酚，具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎、減肥等多種生物活性。近年來，IL-4/IL-13分別與IL-4Rα和IL-13Rα受體結(jié)合，通過激活STAT-6的磷酸化導致巨噬細胞M2型標志因子(Mrc-1、Fizz-1、Ym-1、Arg-1)上調(diào)的相關(guān)信號通路研究的較為清楚。但是，EGCG能否影響IL-4刺激的巨噬細胞M2型標志性因子的表達，目前無人研究，其相關(guān)的

4、信號通路也不清楚。因此，為了考察EGCG對IL-4誘導的巨噬細胞M2型標志因子表達的影響，本課題選取了Arg-1、Ym-1、Fizz-1、iNOS。
　　本課題采用IL-4誘導小鼠巨噬細胞使其產(chǎn)生M2型巨噬細胞的模型。采用Raw264.7和小鼠腹腔巨噬細胞兩種細胞材料。根據(jù)本實驗室先前的研究，EGCG選用12.5μM、25μM和50μM三個處理濃度，IL-4選用20 ng/mL作為處理濃度。實驗分為六組，分別是空白對照組、IL-4

5、處理組、EGCG處理組、三個濃度梯度的EGCG和IL-4共處理組。采用EGCG預處理2小時，IL-4(20 ng/mL)處理24小時，分別采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)和實時熒光定量(qRT-PCR)檢測Arg-1、Ym-1、Fizz-1和iNOS的蛋白水平和mRNA水平。結(jié)果表明，20 ng/mL IL-4和50μM EGCG單獨刺激小鼠巨噬細胞與空白對照組相比均可顯著促進Arg-1、Ym-1、Fizz-1在mRNA和蛋白水平上的

6、表達，抑制iNOS在mRNA和蛋白水平上的表達。三個不同濃度EGCG(12.5μM～50μM)和IL-4共處理組與IL-4處理組相比，Arg-1、Ym-1、Fizz-1基因的mRNA相對表達量和蛋白含量顯著升高，且隨著EGCG濃度的增大，其mRNA相對表達量和蛋白含量逐漸升高，具有劑量依賴性。但iNOS的表達隨著EGCG濃度的增大，抑制作用逐漸增強，也具有劑量依賴性。通過本實驗的研究發(fā)現(xiàn)，EGCG可以促進M2型標志性因子(Arg-1、Y