表沒食子兒茶素沒食子酸酯促進成骨細胞增殖及骨向分化的研究.pdf

1、目的：
　　為探討表沒食子兒茶素沒食子酸酯（Epigallocatechin-3-gallate，EGCG）在成骨細胞增殖及骨向分化中的作用，并對其作用機制進行初步探討。
　　方法：
　　1、在MC3T3-E1細胞中使用MTT法、流水細胞術(shù)檢測、Edu檢測、Real time PCR和Western Blot試驗方法探討不同濃度的EGCG對成骨細胞的毒性作用，并選取合適濃度探討EGCG對成骨細胞增殖作用的影響。

2、　　2、使用堿性磷酸酶染色檢測、堿性磷酸酶測定、茜素紅染色檢測、Real time PCR和Western Blot試驗方法證明EGCG對成骨細胞骨向分化的作用。
　　3、使用堿性磷酸酶染色檢測、Real time PCR和Western Blot試驗方法對EGCG促進成骨細胞增殖分化機制進行初步探討。
　　結(jié)果：
　　1、5μM-50μM的EGCG對MC3T3-E1細胞無明顯毒性作用，而100μM，200μM組的EG

3、CG對MC3T3-E1細胞有毒性作用。其中15μM，30μM兩個濃度組的OD值比對照組明顯升高，提示EGCG在一定的濃度范圍可能對MC3T3-E1細胞有促進其增殖的作用。MTT實驗證實30μM濃度的EGCG可以促進MC3T3-E1細胞增殖。流式細胞術(shù)檢測30μM濃度的EGCG可明顯促進MC3T3-E1細胞S期進程。Edu實驗也顯示30μM的EGCG作用組MC3T3-E1細胞處在S期的細胞比例約為51±8％，而空白對照組S期比例約為38±

4、5％，EGCG處理組的MC3T3-E1細胞S期比例明顯高于對照組，兩組細胞S期比例分布具有統(tǒng)計學差異。30μM的EGCG處理的MC3T3-E1細胞中細胞周期蛋白D1的mRNA表達水平和蛋白表達水平都明顯高于空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義。
　　2、堿性磷酸酶染色顯示EGCG處理組的MC3T3-E1細胞中堿性磷酸酶陽性細胞明顯多于對照組，差異有統(tǒng)計學意義。堿性磷酸酶活性測定顯示，EGCG處理組的MC3T3-E1細胞中堿性磷酸酶活性明顯

5、高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義。Real time PCR和Western Blot的檢測結(jié)果顯示EGCG處理組的MC3T3-E1細胞中堿性磷酸酶的mRNA表達水平和蛋白表達水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義。茜素紅染色顯示，不管是第7天還是第14天，EGCG處理組的MC3T3-E1細胞的礦化結(jié)節(jié)都明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義。
　　3、Real time PCR和Western Blot的檢測結(jié)果顯示，EGCG處理組的MC3

6、T3-E1細胞中β-catenin的mRNA表達水平和蛋白表達水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義。采用ER拮抗劑ICI182，780和EGCG共同處理MC3T3-E1細胞后，β-catenin的mRNA表達水平和蛋白表達水平與對照組沒有統(tǒng)計學差異。采用ER拮抗劑ICI182，780和EGCG共同處理MC3T3-E1細胞后，堿性磷酸酶的活性與對照組沒有統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)論:
　　一定濃度的EGCG可促進成骨細胞的增殖和骨向