表沒食子兒茶素沒食子酸酯促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖及骨向分化的研究.pdf

1、目的：
　　為探討表沒食子兒茶素沒食子酸酯（Epigallocatechin-3-gallate，EGCG）在成骨細(xì)胞增殖及骨向分化中的作用，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　方法：
　　1、在MC3T3-E1細(xì)胞中使用MTT法、流水細(xì)胞術(shù)檢測(cè)、Edu檢測(cè)、Real time PCR和Western Blot試驗(yàn)方法探討不同濃度的EGCG對(duì)成骨細(xì)胞的毒性作用，并選取合適濃度探討EGCG對(duì)成骨細(xì)胞增殖作用的影響。

2、　　2、使用堿性磷酸酶染色檢測(cè)、堿性磷酸酶測(cè)定、茜素紅染色檢測(cè)、Real time PCR和Western Blot試驗(yàn)方法證明EGCG對(duì)成骨細(xì)胞骨向分化的作用。
　　3、使用堿性磷酸酶染色檢測(cè)、Real time PCR和Western Blot試驗(yàn)方法對(duì)EGCG促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖分化機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　結(jié)果：
　　1、5μM-50μM的EGCG對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞無(wú)明顯毒性作用，而100μM，200μM組的EG

3、CG對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞有毒性作用。其中15μM，30μM兩個(gè)濃度組的OD值比對(duì)照組明顯升高，提示EGCG在一定的濃度范圍可能對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞有促進(jìn)其增殖的作用。MTT實(shí)驗(yàn)證實(shí)30μM濃度的EGCG可以促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞增殖。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)30μM濃度的EGCG可明顯促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞S期進(jìn)程。Edu實(shí)驗(yàn)也顯示30μM的EGCG作用組MC3T3-E1細(xì)胞處在S期的細(xì)胞比例約為51±8％，而空白對(duì)照組S期比例約為38±

4、5％，EGCG處理組的MC3T3-E1細(xì)胞S期比例明顯高于對(duì)照組，兩組細(xì)胞S期比例分布具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。30μM的EGCG處理的MC3T3-E1細(xì)胞中細(xì)胞周期蛋白D1的mRNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平都明顯高于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、堿性磷酸酶染色顯示EGCG處理組的MC3T3-E1細(xì)胞中堿性磷酸酶陽(yáng)性細(xì)胞明顯多于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。堿性磷酸酶活性測(cè)定顯示，EGCG處理組的MC3T3-E1細(xì)胞中堿性磷酸酶活性明顯

5、高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Real time PCR和Western Blot的檢測(cè)結(jié)果顯示EGCG處理組的MC3T3-E1細(xì)胞中堿性磷酸酶的mRNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。茜素紅染色顯示，不管是第7天還是第14天，EGCG處理組的MC3T3-E1細(xì)胞的礦化結(jié)節(jié)都明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3、Real time PCR和Western Blot的檢測(cè)結(jié)果顯示，EGCG處理組的MC3

6、T3-E1細(xì)胞中β-catenin的mRNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用ER拮抗劑ICI182，780和EGCG共同處理MC3T3-E1細(xì)胞后，β-catenin的mRNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。采用ER拮抗劑ICI182，780和EGCG共同處理MC3T3-E1細(xì)胞后，堿性磷酸酶的活性與對(duì)照組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　一定濃度的EGCG可促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖和骨向