hELP3與hELP4、yELP4及CTK1之間相互作用的研究.pdf

1、組蛋白甲基化、乙?；缺碛^遺傳修飾對基因表達有重要影響。已有的研究結果表明,酵母Elongator復合物作為一個具有組蛋白乙?；D移酶活性的復合體,協助RNA聚合酶Ⅱ參與GAL1,SSA3等基因的轉錄延伸過程。
　　 人Elongator復合物已從HeLa細胞中被分離出來,并有研究表明它與酵母Elongator復合物的組成高度保守,功能極為相似。Elongator復合物中最引人矚目的是它的ELP3亞基,它有組蛋白乙酰轉移酶活性,

2、從屬于GNAT家族。缺失ELP3亞基可導致多種生長缺陷,其中有些與轉錄延伸缺陷相關。有報道稱ELP3蛋白在神經生物學中也發(fā)揮著至關重要的作用。Elongator復合物可對組蛋白H3的第14位賴氨酸和組蛋白H4的第8位賴氨酸進行乙?；揎?且ELP3亞基C末端的保守的HAT活性中心為Elongator行使功能所必需。生物信息學分析研究表明,ELP3的N末端有一個類似于S-腺苷甲硫氨酸激酶的結構域,這個結構域包含Fe4S4簇,可結合S-腺苷

3、甲硫氨酸。
　　 ELP4也是Elongator復合物的組成成分之一,Elongator復合物參與轉錄和RNA的修飾過程。Elongator復合物的消耗將導致與細胞能動性和細胞位移有關的基因的腦特異性下調表達。我們認為ELP4基因中非編碼序列的突變將阻礙Elongator介導的腦特異性的基因間的相互作用,從而影響腦部發(fā)育,導致癲癇發(fā)作和神經發(fā)育紊亂。
　　 基于以上研究成果,本論文構建了”誘餌”融合質粒pGBKT7-hE

4、LP3和“獵物”融合質粒pGADT7-Rect-yELP4,pGADT7.Rect-hELP4,pGADT7-Rect-CTK1,分三組共轉化入AH109酵母菌菌株中,通過酵母雙雜交實驗初步檢測ELP3與其他三種蛋白在生理狀態(tài)下有無相互作用,并通過GST pull-down實驗在體外對酵母雙雜交實驗獲得的結果進一步驗證。
　　 實驗結果表明,hELP3亞基與hELP4之間存在相互作用,而hELP3亞基與yELP4和CTK1之間沒