VASH1和VEGFR-2在宮頸鱗癌組織的表達(dá)及意義.pdf

1、近年來(lái)，發(fā)病率較高的宮頸癌一直困擾著廣大女性的身心健康，這逐漸引起世界醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重視和研究。全世界每年新增宮頸癌病例約53萬(wàn)，占所有新增女性腫瘤病例的12％，而85%的新發(fā)病例發(fā)生于欠發(fā)達(dá)國(guó)家。雖然近些年宮頸癌的診斷、治療及預(yù)防水平均有所提高，但總體看來(lái)，宮頸癌的發(fā)病率和死亡率仍無(wú)明顯下降。宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展是多因素參與、多步驟演變的病理過(guò)程，血管新生在宮頸癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵性作用，而新血管的形成是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，受多種因子的

2、調(diào)控，通過(guò)某種途徑抑制腫瘤血管生成逐漸成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者抗腫瘤研究的焦點(diǎn)。
　　血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）是最重要的促血管生長(zhǎng)因子，在血管形成的調(diào)節(jié)過(guò)程中發(fā)揮極其關(guān)鍵的作用，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-2（VEGFR-2）是VEGF調(diào)控血管新生的主要酪氨酸激酶功能受體，它主要表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞，主要功能是各種生理、病理情況下介導(dǎo)新生血管的形成。
　　血管生成抑制蛋白VASH1（vasohibin-1）最初是Watanabe K等通過(guò)

3、DNA微陣列分析在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種非傳統(tǒng)型分泌蛋白，也是至今發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)被VEGF、成纖維生長(zhǎng)因子-2（FGF-2）誘導(dǎo)的負(fù)反饋調(diào)節(jié)因子。VASH1不僅參與調(diào)節(jié)人體的正常生理功能，還與許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。研究證實(shí)VEGF與其受體VEGFR-2結(jié)合后，激活下游PKC-δ信號(hào)通路，進(jìn)而促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞VASH1的表達(dá)。VASH1具有抑制血管生成、抑制淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的功能。
　　本研究試圖通過(guò)檢測(cè)VASH1和VEG

4、FR-2在不同宮頸病變組織中的表達(dá)變化，探討兩者在宮頸鱗癌發(fā)病機(jī)制中的作用，也為宮頸癌的臨床診斷和治療提供新的理論基礎(chǔ)。
　　目的:本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化和熒光定量PCR法檢測(cè)VASH1和VEGFR-2在宮頸鱗癌組織、宮頸CIN組織及正常宮頸組織中的表達(dá)情況，分析VASH1、VEGFR-2在宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用及二者的相關(guān)性，為宮頸癌的早期診斷、創(chuàng)新性治療研究提供新的參考依據(jù)。
　　材料與方法:
　　1．實(shí)驗(yàn)對(duì)象：收集

5、2013年9月-2014年11月于鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院門診或住院手術(shù)治療切除的宮頸組織標(biāo)本90例，其中正常宮頸組織20例（年齡32～67歲，平均45.6歲），宮頸CIN組織25例（年齡30～64歲，平均42.2歲），宮頸鱗癌組織45例（年齡30～70歲，平均46.1歲），其中18例鱗癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者27例；按FIGO臨床分期：I期18例，II期16例，III期11例；病理組織學(xué)分級(jí)：G1級(jí)19例，G2級(jí)13例，G3級(jí)13

6、例。所有標(biāo)本常規(guī)取材，一部分經(jīng)10%甲醛固定、石蠟包埋、4μm厚度常規(guī)切片，另一部分快速置于液氮中-80℃冰箱保存。所有患者術(shù)前均無(wú)放療、化療及免疫治療史，術(shù)后病理結(jié)果均由病理醫(yī)師嚴(yán)格確診。
　　2．實(shí)驗(yàn)方法：分別采用免疫組化和熒光定量PCR法檢測(cè)VASH1和VEGFR-2在正常宮頸組織、CIN和宮頸鱗癌組織中的表達(dá)情況，嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。
　　3．統(tǒng)計(jì)方法：采用SPSS17.0軟件統(tǒng)計(jì)，定性資料比較采用χ2檢驗(yàn)

7、、Fisher確切概率法，定量資料結(jié)果以-x±s表示，各組間比較采用單因素方差分析、t檢驗(yàn)、LSD-t檢驗(yàn)等，VASH1和VEGFR-2相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果:
　　1．免疫組化結(jié)果：VASH1蛋白和VEGFR-2蛋白均主要在細(xì)胞質(zhì)（膜）中表達(dá)。VASH1在宮頸鱗癌、宮頸CIN及正常宮頸三組中的表達(dá)率分別為75.6%、44.0%和15.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；VEGFR-2在宮

8、頸鱗癌、宮頸CIN及正常宮頸三組中的表達(dá)率分別為66.7%、40.0%和10.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2．熒光定量PCR結(jié)果：VASH1 mRNA在正常宮頸、宮頸CIN及宮頸鱗癌中的相對(duì)表達(dá)量分別為1.000±0.000、4.365±2.068和15.509±1.657，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；VEGFR-2 mRNA在正常宮頸、宮頸CIN及宮頸鱗癌中的相對(duì)表達(dá)量分別為1.000±0.000、3.978±1.968和22.880±

9、1.232，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3．VASH1和VEGFR-2與宮頸鱗癌患者年齡的關(guān)系:VASH1在年齡≥40歲和<40歲兩組的蛋白表達(dá)率為80.0%、66.7%（P>0.05）；mRNA相對(duì)表達(dá)量為16.959±1.709、12.969±1.483(P>0.05）。
　　VEGFR-2在年齡≥40歲和<40歲兩組的蛋白表達(dá)率為70.0%、53.3%（P>0.05）；mRNA相對(duì)表達(dá)量為26.723±3.392、16.7

10、26±1.554（P>0.05）。宮頸鱗癌中VASH1和VEGFR-2的表達(dá)與患者年齡無(wú)明顯相關(guān)性。
　　4．VASH1和VEGFR-2與宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系:VASH1在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的蛋白表達(dá)率為94.4%，mRNA相對(duì)表達(dá)量為21.676±1.865，明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移組63.0%，12.406±1.247，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　VEGFR-2在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的蛋白表達(dá)率為83.3%，mRNA相對(duì)表達(dá)量為42.814±

11、2.916,明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移組51.9%，15.043±2.239，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5．VASH1和VEGFR-2與宮頸鱗癌臨床分期的關(guān)系:VASH1在Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ期中蛋白表達(dá)率分別是64.5%、100.0%（P<0.05）；mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為13.501±1.300、23.802±2.208（P<0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　VEGFR-2在Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ期中蛋白表達(dá)率分別是51.6%、92.9%（P<

12、0.05）；mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為18.026±2.521、47.604±3.006（P<0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　6．VASH1和VEGFR-2與宮頸鱗癌病理學(xué)分級(jí)的關(guān)系:VASH1在G1～G2級(jí)、G3級(jí)兩組中的蛋白表達(dá)率為71.9%、84.6%（P>0.05）；mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為14.400±1.257、18.726±2.742(P>0.05),差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　VEGFR-2在G1～G2級(jí)

13、、G3級(jí)兩組中的蛋白表達(dá)率為53.1%、92.3%（P<0.05）；mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為14.805±1.617、66.579±3.653（P<0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　7．宮頸鱗癌中VASH1和VEGFR-2的相關(guān)性:免疫組化結(jié)果：VASH1和VEGFR-2在宮頸鱗癌中的表達(dá)呈正相關(guān)。熒光定量 PCR結(jié)果：VASH1和VEGFR-2在宮頸鱗癌中的表達(dá)呈正相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.VASH1和VEGF