助孕Ⅰ號方孕前直腸給藥對腎虛血瘀模型大鼠母胎界面微環(huán)境的影響.pdf

1、研究目的：
　　基于前期對助孕Ⅰ號方治療不孕癥患者或介入治療IVF-ET失敗患者（腎虛血瘀型）的臨床療效研究及實驗研究，為進(jìn)一步探索其對妊娠早期維持妊娠的助孕效應(yīng)，進(jìn)一步揭示其作用機(jī)制，本實驗通過觀察助孕Ⅰ號方對腎虛血瘀模型大鼠妊娠早期子宮臟器指數(shù)、妊娠率及胚泡著床數(shù)、子宮蛻膜組織形態(tài)學(xué)、大鼠妊娠早期子宮組織金屬基質(zhì)蛋白酶MMP-9、其抑制物TIMP-1及白血病抑制因子LIF含量的影響，初步探討助孕Ⅰ號方改善母胎界面微環(huán)境、提高免

2、疫耐受的作用機(jī)制，為臨床用藥提供理論依據(jù)，為臨床新藥的研發(fā)提供新思路及奠定基礎(chǔ)。
　　研究方法：
　　通過陰道分泌物涂片及判定，將處于動情前期的普通級健康成年雌性未孕SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、助孕Ⅰ號方低、高劑量組、五子衍宗丸組、復(fù)方丹參組。除空白組外，其余各組大鼠通過給予羥基脲灌胃+腎上腺素皮下注射造成腎虛加血瘀的復(fù)合模型。造模的同時，給予各用藥組大鼠以相應(yīng)的藥物治療。造模成功后，各組大鼠通過陰道分泌物涂片篩選出處于

3、動情期的雌鼠，按雌雄大鼠2：1的比例進(jìn)行合籠，以第二日發(fā)現(xiàn)陰栓或陰道涂片觀察到精蟲者，記為妊娠第1天。妊娠大鼠停止給藥治療，于妊娠第8天股動脈取血后，快速脫頸椎處死大鼠，迅速剖離出子宮稱重后放入中性甲醛固定液，觀察各組大鼠子宮、胚泡形態(tài)及胚泡著床數(shù)，比較各組大鼠妊娠率及子宮臟器指數(shù)，在光鏡下觀察各組大鼠子宮蛻膜組織形態(tài)學(xué)的改變，通過免疫組化法檢測各組大鼠妊娠第8天子宮組織中MMP-9、TIMP-1及LIF的表達(dá)情況。
　　研究結(jié)果

4、：
　　1.助孕Ⅰ號方孕前直腸給藥對腎虛血瘀模型大鼠妊娠早期子宮臟器指數(shù)的影響
　　模型組子宮濕重及子宮臟器指數(shù)顯著低于空白組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），表明造模可能影響模型大鼠子宮及胚胎的生長發(fā)育；與模型組相比，助孕Ⅰ號方高劑量組、助孕Ⅰ號方低劑量組及五子組大鼠子宮濕重及子宮臟器指數(shù)均高于模型組大鼠子宮濕重及子宮臟器指數(shù)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示助孕Ⅰ號方、五子衍宗丸均有促進(jìn)腎虛血瘀模型妊娠大鼠子宮及

5、胚胎生長發(fā)育的作用；丹參組大鼠子宮濕重及子宮臟器指數(shù)有高于模型組大鼠的趨勢，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.助孕Ⅰ號方孕前直腸給藥對腎虛血瘀模型大鼠妊娠率及胚泡著床數(shù)的影響
　　模型組大鼠妊娠率低于空白組大鼠妊娠率（P＜0.05）；模型組大鼠妊娠第8天平均著床胚泡數(shù)較空白組大鼠妊娠第8天平均著床胚泡數(shù)顯著減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示腎虛血瘀模型造模影響大鼠妊娠結(jié)局，降低大鼠妊娠率并抑制妊娠大鼠胚泡

6、生長發(fā)育；助孕Ⅰ號方高劑量組大鼠妊娠率高于模型組大鼠妊娠率(P＜0.05），第8天平均著床胚泡數(shù)顯著高于模型組大鼠（P＜0.05）；助孕Ⅰ號方低劑量組大鼠妊娠率及妊娠第8天平均著床胚泡數(shù)均有高于模型組的趨勢，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），提示助孕Ⅰ號方可提高腎虛血瘀模型大鼠妊娠率及促進(jìn)胚胎的發(fā)育。五子組及丹參組大鼠妊娠率及妊娠第8天平均著床胚泡數(shù)均有高于模型組大鼠的趨勢（P＞0.05）。
　　3.助孕Ⅰ號方孕前直腸給藥對腎虛血

7、瘀模型大鼠妊娠早期子宮組織MMP-9、TIMP-1及其比值表達(dá)的影響
　　模型組大鼠子宮組織MMP-9表達(dá)的面積總和顯著低于空白組(P＜0.05)，空白組大鼠子宮組織MMP-9表達(dá)的積分光密度總和有高于模型組的趨勢(P＞0.05)；與模型組相比，用藥各組大鼠子宮組織MMP-9表達(dá)的面積總和均顯著增加(P＜0.05)；除丹參組外的其他用藥各組大鼠子宮組織MMP-9表達(dá)的積分光密度總和較模型組相比，均明顯增高(P＜0.05)；丹參組大

8、鼠子宮組織MMP-9表達(dá)的積分光密度總和有高于模型組的趨勢(P＞0.05)。
　　模型組大鼠子宮組織TIMP-1表達(dá)的面積總和顯著低于空白組(P＜0.05)。除丹參組外的其他用藥各組大鼠子宮組織TIMP-1表達(dá)的面積總和較模型組相比均顯著升高(P＜0.05)；與模型組大鼠相比，助孕Ⅰ號方高劑量組顯著提高了大鼠子宮組織TIMP-1表達(dá)的積分光密度總和（P＜0.05)，其余用藥各組大鼠子宮組織TIMP-1表達(dá)的積分光密度總和均有高于模

9、型組大鼠子宮組織TIMP-1表達(dá)的積分光密度總和的趨勢。
　　空白組、助孕Ⅰ號方低劑量組、助孕Ⅰ號方高劑量組、五子組大鼠妊娠組織中MMP-9/TIMP-1面積總和及積分光密度總和均接近1：1，以助孕Ⅰ號方高劑量組大鼠妊娠組織中MMP-9/TIMP-1比值最接近1。
　　4.助孕Ⅰ號方孕前直腸給藥對腎虛血瘀模型大鼠妊娠早期子宮組織LIF表達(dá)的影響
　　模型組LIF表達(dá)的積分光密度總和顯著低于空白組（P＜0.05），空白組

10、大鼠子宮組織LIF表達(dá)的面積總和有高于模型組的趨勢(P＞0.05)。與模型組比較，除助孕Ⅰ號方低劑量組外，其他各組用藥大鼠子宮組織LIF表達(dá)的面積總和和積分光密度總和均顯著增高（P＜0.05)；助孕Ⅰ號方低劑量組大鼠子宮LIF表達(dá)的面積總和和積分光密度總和有高于模型組大鼠的趨勢(P＞0.05)；助孕Ⅰ號方高劑量組LIF表達(dá)的面積總和均高于低劑量組(P＜0.05)。
　　5.助孕Ⅰ號方孕前直腸給藥對腎虛血瘀模型大鼠妊娠早期子宮組織L

11、IF、MMP-9、TIMP-1表達(dá)的綜合調(diào)控
　　各組大鼠妊娠早期子宮組織LIF表達(dá)的面積總和與各組相應(yīng)MMP-9、TIMP-1表達(dá)的面積總和，在0.01水平（雙側(cè)）上顯著相關(guān)；各組大鼠妊娠早期子宮組織LIF表達(dá)的積分光密度總和與各組相應(yīng)MMP-9表達(dá)的積分光密度總和，在0.05水平（雙側(cè)）上顯著相關(guān)。
　　研究結(jié)論：
　　1.助孕Ⅰ號方孕前直腸給藥可促進(jìn)腎虛血瘀模型大鼠子宮及胚胎的生長發(fā)育，促使子宮內(nèi)膜蛻膜樣變，改善

12、子宮內(nèi)膜組織形態(tài)，為胚胎的發(fā)育提供充足的物質(zhì)基礎(chǔ)，從而提高妊娠率及著床胚胎數(shù)。
　　2.助孕Ⅰ號方孕前直腸給藥可改善母胎界面微環(huán)境，提高母體免疫系統(tǒng)對胚胎的耐受能力，繼而有利于妊娠的維持，其機(jī)制可能是：
　　﹙1﹚助孕Ⅰ號方孕前直腸給藥可提高腎虛血瘀模型大鼠妊娠子宮組織中MMP-9、TIMP-1的表達(dá)，并能維持MMP-9/TIMP-1比值的動態(tài)平衡狀態(tài)，使二者的表達(dá)水平處于均衡相對平穩(wěn)狀態(tài)，確保滋養(yǎng)細(xì)胞對子宮蛻膜適度浸潤的同