助孕1號方對腎虛血瘀型大鼠子宮內(nèi)膜容受性的影響及其安全性研究.pdf

1、研究目的：
　　助孕1號方是導(dǎo)師用于輔助治療腎虛血瘀型不孕癥患者的臨床驗(yàn)方，由五子衍宗丸化裁而成，具有補(bǔ)腎填精，活血化瘀的功效，能改善患者的子宮內(nèi)膜容受性，從而提高胚胎著床率。為了評價助孕1號方的安全性，闡明其療效，進(jìn)一步揭示其作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)對助孕1號方進(jìn)行了毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，同時觀察助孕1號方對腎虛血瘀模型大鼠體重、子宮臟器指數(shù)，子宮內(nèi)膜組織形態(tài)學(xué)，子宮內(nèi)膜組織金屬基質(zhì)蛋白酶 MMP-9及其抑制物 TIMP-1含量和比值的影響，

2、初步探討助孕1號方的安全性及其改善子宮內(nèi)膜容受性的作用機(jī)制，為臨床運(yùn)用提供理論依據(jù)，為本方的進(jìn)一步開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
　　研究方法：
　　1.毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)
　　以最大濃度、最大給藥容量灌腸給藥，2小時1次，8次／天，觀察助孕1號方對小鼠的急性毒性作用。
　　2.助孕1號方對腎虛血瘀模型大鼠的影響
　　將處于動情前期的成年雌性SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、助孕1號方高、低劑量組、五子衍宗丸組，以五子組作為陽性藥物

3、對照組。通過羥基脲灌胃造成大鼠腎虛模型，造模完成后進(jìn)行合籠，繼續(xù)給藥至妊娠第4天，除空白組和五子組外，各組大鼠于末次給藥后1h后尾靜脈快速推注10％高分子右旋糖苷造成血瘀模型，30min后處死大鼠，取出子宮迅速稱重后放入FAA液中固定，計(jì)算子宮臟器指數(shù)，在光鏡下觀察各組大鼠子宮內(nèi)膜組織病理形態(tài)學(xué)的改變，并用放免法檢測子宮內(nèi)膜組織中MMP-9、TIMP-1的含量。
　　研究結(jié)果：
　　1.急性毒性實(shí)驗(yàn)：小鼠灌腸給藥后觀察期間，

4、對照組及給藥組小鼠均活動靈敏，精神狀況好，飲食、二便正常，眼、鼻及口腔潔凈，無異常分泌物，無任研究目的：
　　助孕1號方是導(dǎo)師用于輔助治療腎虛血瘀型不孕癥患者的臨床驗(yàn)方，由五子衍宗丸化裁而成，具有補(bǔ)腎填精，活血化瘀的功效，能改善患者的子宮內(nèi)膜容受性，從而提高胚胎著床率。為了評價助孕1號方的安全性，闡明其療效，進(jìn)一步揭示其作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)對助孕1號方進(jìn)行了毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，同時觀察助孕1號方對腎虛血瘀模型大鼠體重、子宮臟器指數(shù)，子宮內(nèi)

5、膜組織形態(tài)學(xué)，子宮內(nèi)膜組織金屬基質(zhì)蛋白酶 MMP-9及其抑制物 TIMP-1含量和比值的影響，初步探討助孕1號方的安全性及其改善子宮內(nèi)膜容受性的作用機(jī)制，為臨床運(yùn)用提供理論依據(jù)，為本方的進(jìn)一步開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
　　研究方法：
　　1.毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)
　　以最大濃度、最大給藥容量灌腸給藥，2小時1次，8次／天，觀察助孕1號方對小鼠的急性毒性作用。
　　2.助孕1號方對腎虛血瘀模型大鼠的影響
　　將處于動情前期的成年

6、雌性SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、助孕1號方高、低劑量組、五子衍宗丸組，以五子組作為陽性藥物對照組。通過羥基脲灌胃造成大鼠腎虛模型，造模完成后進(jìn)行合籠，繼續(xù)給藥至妊娠第4天，除空白組和五子組外，各組大鼠于末次給藥后1h后尾靜脈快速推注10%高分子右旋糖苷造成血瘀模型，30min后處死大鼠，取出子宮迅速稱重后放入FAA液中固定，計(jì)算子宮臟器指數(shù)，在光鏡下觀察各組大鼠子宮內(nèi)膜組織病理形態(tài)學(xué)的改變，并用放免法檢測子宮內(nèi)膜組織中MMP-9、T

7、IMP-1的含量。
　　研究結(jié)果：
　　1.急性毒性實(shí)驗(yàn)：小鼠灌腸給藥后觀察期間，對照組及給藥組小鼠均活動靈敏，精神狀況好，飲食、二便正常，眼、鼻及口腔潔凈，無異常分泌物，無任何異常反應(yīng)，兩組小鼠體重增長差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>O.05），未出現(xiàn)一只動物死亡，脫頸處死小鼠，解剖后觀察主要內(nèi)臟器官無異常改變。實(shí)驗(yàn)中測定小鼠1日內(nèi)的最大給藥量為77.38g/kg，相當(dāng)于臨床成人日用劑量的106倍，說明在此劑量下灌腸對小鼠是安全的。

8、
　　2.助孕1號方對腎虛血瘀模型大鼠的影響
　　(1)助孕1號方對腎虛血瘀模型大鼠體重增長的影響
　　模型組體重低于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說明造?？赡軐Υ笫篌w重增長有抑制作用；與模型組相比，助孕1號方高、低劑量組體重均高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01），高劑量組體重大于低劑量組，但差異不顯著（P>0.05），說明助孕1號方可促進(jìn)模型大鼠體重的增長。
　　(2)助孕1號

9、方對腎虛血瘀模型大鼠子宮臟器指數(shù)的影響
　　模型組子宮臟器指數(shù)低于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說明造模可能會抑制大鼠子宮的生長；助孕1號方高、低劑量組子宮臟器指數(shù)均高于模型組大鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示助孕1號方有促進(jìn)大鼠子宮生長的作用。助孕1號方高劑量組子宮指數(shù)高于低劑量組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　(3)助孕1號方對腎虛血瘀模型大鼠子宮內(nèi)膜組織形態(tài)學(xué)的影響
　　模型組內(nèi)

10、膜發(fā)育較差，內(nèi)膜腺體小而直，間質(zhì)致密，細(xì)胞呈梭形，螺旋動脈少，位于基層，呈增生期改變；部分間質(zhì)致密，部分間質(zhì)疏松、水腫，呈分泌期改變，間質(zhì)發(fā)育不同步?？瞻捉M與用藥組子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量多，分布均勻，腺體彎曲，腺上皮多呈單層高柱狀上皮細(xì)胞，并夾雜有透亮細(xì)胞，少數(shù)出現(xiàn)頂漿分泌，腺腔明顯增大，內(nèi)有分泌物，間質(zhì)疏松水腫，螺旋小動脈增生，接近功能層，部分間質(zhì)中見梭形細(xì)胞。其中模型組子宮內(nèi)膜發(fā)育成熟的僅為34%，發(fā)育延遲的為17%，發(fā)育不同步的內(nèi)膜達(dá)5

11、0%；助孕1號方高劑量組內(nèi)膜發(fā)育狀況與空白組相當(dāng)，內(nèi)膜發(fā)育成熟的占83%，發(fā)育延遲的占17%；助孕1號方低劑量組內(nèi)膜發(fā)育成熟率為64%，發(fā)育延遲率為34%，除模型組外，各組大鼠均未出現(xiàn)內(nèi)膜發(fā)育不同步的現(xiàn)象。
　　(4)助孕1號方對腎虛血瘀模型大鼠子宮內(nèi)膜組織MMP-9表達(dá)的影響
　　模型組子宮內(nèi)膜上皮及間質(zhì)中MMP-9表達(dá)的面積總和、積分光密度總和及平均黑度均值低于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與模型組相比，助孕

12、1號方高、低劑量組 MMP-9表達(dá)的面積總和、積分光密度總和及黑度均值顯著增加(P<0.05或P<0.01)；高劑量組MMP-9表達(dá)的面積總和，積分光密度總和及平均黑度均高于低劑量組，子宮內(nèi)膜上皮中各項(xiàng)表達(dá)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)，子宮內(nèi)膜間質(zhì)中MMP-9表達(dá)的面積總和及積分光密度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　(5)助孕1號方對腎虛血瘀模型大鼠子宮內(nèi)膜組織TIMP-1表達(dá)的影響
　　模型組

13、子宮內(nèi)膜上皮及間質(zhì)中TIMP-1表達(dá)的面積總和、積分光密度總和及平均黑度均值低于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。助孕1號方高、低劑量組TIMP-1表達(dá)的面積總和、積分光密度總和平均黑度均值均高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01)；助孕1號方高劑量組TIMP-1表達(dá)的面積總和，積分光密度和平均黑度均值高于低劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。
　　(6)助孕1號方對腎虛血瘀模型大鼠子

14、宮內(nèi)膜組織MMP-9/TIMP-1表達(dá)的影響
　　模型組子宮內(nèi)膜上皮MMP-9/TIMP-1表達(dá)的積分光密度總和，平均黑度低于空白組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），助孕1號方組MMP-9/TIMP-1表達(dá)的面積總和、平均黑度均值、積分光密度總和平均黑度均值均高于模型組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，各用藥組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　模型組子宮內(nèi)膜間質(zhì)MMP-9/TIMP-1表達(dá)的面積總和，平均黑度均

15、值低于空白組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），各用藥組MMP-9/TIMP-1表達(dá)的面積總和高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01)。
　　結(jié)論：
　　1．毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明小鼠1日內(nèi)的最大給藥量為77.38g/kg，相當(dāng)于臨床成人日用劑量的106倍，無一只動物死亡，說明在此劑量下灌腸對小鼠是安全的；
　　2.助孕1號方能促進(jìn)模型大鼠體重及子宮的生長，并能改善其子宮內(nèi)膜組織形態(tài)學(xué)，使內(nèi)膜生長與胚胎發(fā)育同步，有利于胚