基于PVAT-Adiponectin探索復(fù)方芪麻膠囊對高血壓血管損傷的影響.pdf

1、第一部分臨床研究
　　目的:
　　評價(jià)氣虛痰濁型原發(fā)性高血壓(Essential Hypertension，EH)患者血清脂聯(lián)素(Adiponectin，Adipo，APN)水平的變化及其對高血壓血管損傷的預(yù)測價(jià)值;評價(jià)益氣化痰方藥—復(fù)方芪麻膠囊對氣虛痰濁型EH患者血清APN水平的影響。
　　方法:
　　選取中醫(yī)證型為氣虛痰濁、高血壓1級或2級的EH患者84例，同時選取健康體檢者30例，通過測定血清APN水平、臂

2、-踝動脈脈搏波傳導(dǎo)速度(Brachial-AnkleArtery PWV，baPWV)及肱動脈血流介導(dǎo)的血管舒張功能(Flow-mediated Diastolic Function，F(xiàn)MD)水平，評價(jià)氣虛痰濁型EH患者血清APN水平、baPWV及FMD水平的變化;分析氣虛痰濁型EH患者血清APN水平與性別、年齡、血壓、高血壓病程、baPWV及FMD之間的相關(guān)性。
　　將84例氣虛痰濁型EH患者隨機(jī)分為兩組:常規(guī)降壓治療組（簡稱“

3、常規(guī)組”）、常規(guī)降壓聯(lián)合復(fù)方芪麻膠囊治療組（簡稱“聯(lián)合組”），每組各42例。兩組患者均停用原降壓藥物，按照本研究的給藥方案進(jìn)行治療。常規(guī)組給予替米沙坦片治療，如2W后血壓控制不達(dá)標(biāo)則加用苯磺酸氨氯地平片，視血壓水平必要時進(jìn)一步調(diào)整用藥;聯(lián)合組則在常規(guī)降壓治療的基礎(chǔ)上，給予復(fù)方芪麻膠囊治療，用藥時間為8W。用藥結(jié)束后，評價(jià)兩組患者血壓水平和臨床癥狀的變化，并再次測定血清APN水平，對APN水平的相關(guān)影響因素進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:

4、r>　　(1)與校正性別、年齡的健康對照組相比，氣虛痰濁型EH患者APN水平、FMD水平明顯下降，baPWV水平明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　(2)氣虛痰濁型EH患者血清APN水平與性別、年齡、血壓無明顯相關(guān)性（r分別為-0.135，0.167，-0.112，均P＞0.05）;與高血壓病程、baPWV顯著負(fù)相關(guān)（r分別為-0.225，-0.242，均P＜0.05），與FMD顯著正相關(guān)（r為0.591，P＜0.

5、01）。
　　(3)兩組分別有39例和38例患者完成了治療。治療后兩組收縮壓、舒張壓水平均顯著下降（P＜0.01），聯(lián)合組收縮壓水平顯著低于常規(guī)組（P＜0.05），而常規(guī)組舒張壓水平顯著低于聯(lián)合組(P＜0.01)。聯(lián)合組降壓總有效率89.47％，高于常規(guī)組的76.92％，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　(4)治療后兩組中醫(yī)癥候積分均較治療前顯著下降(P＜0.01)，聯(lián)合組中醫(yī)癥候積分顯著低于常規(guī)組(P＜0.05)。

6、
　　(5)治療后兩組患者血清APN水平均較治療前有所增加。其中常規(guī)組與治療前相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;聯(lián)合組與治療前相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。Logistic回歸分析示，高血壓病程和復(fù)方芪麻膠囊是APN水平的影響因素（OR分別為0.389，6.983，均P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　(1)氣虛痰濁型EH患者存在低APN水平，且其APN水平與baPWV顯著負(fù)相關(guān)，與FMD顯著正相關(guān)，提示

7、APN可作為氣虛痰濁型EH患者血管損傷的預(yù)測因子。
　　(2)復(fù)方芪麻膠囊聯(lián)合常規(guī)降壓治療可顯著降低氣虛痰濁型EH患者血壓水平，同時可顯著改善氣虛痰濁型EH患者臨床癥狀。
　　(3)復(fù)方芪麻膠囊聯(lián)合常規(guī)降壓治療可顯著增加氣虛痰濁型EH患者血清APN水平，結(jié)合前期研究，推測這可能是其改善高血壓患者動脈僵硬度及血管內(nèi)皮功能的機(jī)制之一。
　　第二部分實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:
　　探索復(fù)方芪麻膠囊對高血壓血管損傷的效果

8、和機(jī)制。
　　方法:
　　選用14W齡的自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneously Hypertersive Rats，SHR)為研究對象，以WKY大鼠(Wistar-Kyoto Rats，WKY)作為對照。SHR共50只，雌雄各半，按照體重隨機(jī)分為SHR模型對照組、替米沙坦組、復(fù)方芪麻膠囊高劑量組（簡稱“芪麻高劑組”）、復(fù)方芪麻膠囊中劑量組（簡稱“芪麻中劑組”）、復(fù)方芪麻膠囊低劑量組（簡稱“芪麻低劑組”），飼養(yǎng)過程中于特

9、定的時間點(diǎn)測量大鼠血壓及體重。
　　共飼養(yǎng)11W后（達(dá)25W齡）開始給藥。SHR模型組及WKY組均給予蒸餾水（按10ml/kg體重，每天1次）灌胃，替米沙坦組按照7.2mg/kg/d的劑量，配藥灌胃;芪麻高劑組為3.7152g生藥/kg/天、中劑組為1.8596g生藥/kg/天、低劑組為0.9288g生藥/kg/天。給藥周期為8W。
　　給藥完成后，麻醉下行頸動脈穿刺進(jìn)行有創(chuàng)血壓測量，以再次評定大鼠血壓水平;采血，收集血清標(biāo)

10、本，分裝后于-80℃超低溫冰箱凍存待測;剪取1cm段主動脈，含血管周圍脂肪組織(Perivascular Adipose Tissue，PVAT)，置于中性甲醛中備用，將余下主動脈的PVAT和血管分離并分裝后，置于-80℃超低溫冰箱凍存待測。
　　采用試劑盒測定各組大鼠血清APN和一氧化氮(NO)水平;進(jìn)行HE染色，觀察各組大鼠PVAT及主動脈形態(tài)改變;采用熒光定量(RT-qPCR)方法檢測PVAT中APN及主動脈中內(nèi)皮型一氧化氮

11、合酶(eNOS)、單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)、細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1)、核轉(zhuǎn)錄因子P65(NF-κB p65)、腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα)、脂聯(lián)素受體1(Adiponectin receptor1，Adipo R1)、脂聯(lián)素受體2(Adiponectinreceptor2，Adipo R2)等的mRNA表達(dá)，以18S基因作為內(nèi)參;采用蛋白質(zhì)免疫印記（Western Blot，WB）方法，檢測主動脈中Adipo R1

12、，Adipo R2，APPL1，AMPKα及磷酸化AMPKα(p-AMPKα Thr172)、磷酸化eNOS(p-eNOS Ser1177)的表達(dá)水平。采用免疫組化兩步法檢測各組大鼠主動脈Adipo R1的分布和表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　(1)所用SHR模型高血壓狀態(tài)形成良好。與給藥前比較，替米沙坦組、芪麻低劑組、芪麻中劑組、芪麻高劑組收縮壓分別于給藥1W后、4W后、6W后、8W后出現(xiàn)顯著下降(P＜0.01或P＜0.05)

13、。
　　(2)與WKY組相比，SHR模型組血清APN和NO水平明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。與SHR模型組相比，替米沙坦組、芪麻中劑組、芪麻低劑組APN和NO均明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）;芪麻高劑組APN和NO均有所上升，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　(3)常規(guī)HE染色示，SHR模型組動脈中層彈性纖維增生，平滑肌細(xì)胞排列紊亂，替米沙坦組及復(fù)方芪麻膠囊各劑量組較上述有不同

14、程度改善。各組大鼠主動脈內(nèi)徑、內(nèi)-中膜厚度及PVAT中脂肪細(xì)胞形態(tài)和體積大小的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　(4) RT-qPCR示，與WKY組相比，SHR模型組主動脈eNOS mRNA表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);與SHR模型組比較，替米沙坦組、芪麻中劑量和低劑量組eNOS mRNA表達(dá)均明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。與WKY組相比，SHR模型組ICAM-1 mRNA表達(dá)顯著升高，差異

15、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;替米沙坦組、復(fù)方芪麻膠囊各劑量組與SHR模型組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。SHR模型組NF-κ B p65 mRNA的表達(dá)也較WKY組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;替米沙坦組、復(fù)方芪麻膠囊各劑量組與SHR模型組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組MCP-1 mRNA表達(dá)水平的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　(5) RT-qPCR示，與WKY組相比，除AMPK

16、α2，SHR模型組PVAT中APN，主動脈中Adipo R1，AdipoR2和AMPKα1的mRNA表達(dá)均顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與SHR模型組相比，替米沙坦組APN，Adipo R1，AdipoR2和AMPKα1 mRNA表達(dá)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）;芪麻低劑組APN，Adipo R1，AdipoR2，AMPKα1和AMPKα2也顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.50或P＜0.01

17、);而芪麻中劑組Adipo R1，Adipo R2，AMPKα1和AMPKα2表達(dá)水平也較SHR模型組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）;芪麻高劑組Adipo R1和AMPKα2表達(dá)也顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01).
　　(6) WB示，與WKY組相比，SHR模型組Adipo R1，Adipo R2，APPL1，AMPKα，p-AMPKα和p-eNOS蛋白水平均顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

18、（P＜0.01）。與SHR模型組相比，替米沙坦組Adipo R1，APPL1，AMPKα和p-eNOS蛋白表達(dá)水平顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;芪麻低劑組Adipo R1，Adipo R2，AMPKα，p-AMPKα和p-eNOS表達(dá)也明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）;芪麻中劑組Adipo R2，AMPKα，p-AMPKα和p-eNOS表達(dá)也較SHR模型組明顯上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P

19、＜0.05）;芪麻高劑組AMPKα，p-AMPKα和p-eNOS水平也明顯上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。
　　(7)免疫組化示，AdipoR1在主動脈全層均有表達(dá)，尤其是中膜平滑肌細(xì)胞胞漿及內(nèi)皮細(xì)胞胞漿。在WKY組，AdipoR1呈正常狀態(tài)表達(dá)，SHR模型組AdipoR1的蛋白表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;替米沙坦及復(fù)方芪麻膠囊各劑量組AdipoR1的表達(dá)均較SHR模型組顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

20、意義（P＜0.01或P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　(1) SHR高血壓狀態(tài)形成良好，是研究EH的可靠動物模型。
　　(2)復(fù)方芪麻膠囊可顯著降低SHR的血壓水平，增加SHR血清APN及NO水平，減輕SHR主動脈損傷程度。
　　(3)復(fù)方芪麻膠囊可顯著上調(diào)SHR主動脈eNOS表達(dá)水平，對其他血管損傷相關(guān)因子如ICAM-1，MCP-1，NF-κ B p65等影響不顯著。
　　(4)復(fù)方芪麻膠囊可能通過影響P