小鼠視覺系統(tǒng)中血管發(fā)育與Reelin表達(dá)的關(guān)系.pdf

1、實驗利用冰凍切片技術(shù)、震蕩切片技術(shù)、免疫熒光染色、明膠墨汁灌注和HE染色等方法，探究脊椎動物小鼠視覺系統(tǒng)中血管發(fā)育與Reelin表達(dá)的相關(guān)性及Reelin在成年鯽魚、牛蛙、家鴿和家兔等幾種脊椎動物視網(wǎng)膜中的表達(dá)。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：脊椎動物小鼠視覺系統(tǒng)中血管發(fā)育與Reelin表達(dá)的相關(guān)性研究。實驗?zāi)康模禾骄考棺祫游镄∈笠曈X系統(tǒng)中血管發(fā)育與Reelin表達(dá)的相關(guān)性。實驗方法：將實驗對象分成野生型和 Reeler小鼠兩

2、組。野生型小鼠取 P0（小鼠出生當(dāng)天記為 P0），P3， P7，P14，P20和成年等各年齡點，分別取其視網(wǎng)膜、上丘、視皮層V1區(qū)進(jìn)行免疫熒光染色和明膠墨汁灌注，觀察血管的發(fā)育和Reelin的表達(dá)情況。對視網(wǎng)膜進(jìn)行鋪片和冰凍切片，CollagenⅣ抗體染色，觀察其血管的發(fā)育情況。對上丘和皮層V1區(qū)的研究中，用明膠墨汁灌注的方法顯示血管，觀察該區(qū)域中血管的發(fā)育情況。對震蕩切片，用GFAP抗體和Reelin抗體進(jìn)行免疫熒光染色分別顯示與血管

3、發(fā)育相關(guān)的星形膠質(zhì)細(xì)胞及Reelin的表達(dá)情況。Reeler小鼠取P0和成年階段視網(wǎng)膜用CollagenⅣ抗體進(jìn)行免疫熒光染色，觀察血管的發(fā)育情況。實驗結(jié)果：（1）CollagenⅣ染色顯示小鼠視網(wǎng)膜血管是出生后開始生成，且視網(wǎng)膜表層血管和深層血管都是以視乳頭為中心向四周進(jìn)行蔓延。表層血管在P10年齡點覆蓋整個視網(wǎng)膜，深層血管在P8時開始生長，至P14階段鋪滿視網(wǎng)膜，小鼠視網(wǎng)膜血管系統(tǒng)發(fā)育成熟。Reeler小鼠中 P0階段血管已經(jīng)覆蓋了

4、整個視網(wǎng)膜，但成年小鼠視網(wǎng)膜中深層血管的分支與野生型相比明顯減少。隨著小鼠視網(wǎng)膜的發(fā)育， Reelin首先表達(dá)在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和內(nèi)網(wǎng)層，由此發(fā)出垂直分支向外網(wǎng)層延伸，至P14及成年，主要分布在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)網(wǎng)層和外網(wǎng)層。（2）在 P0階段，上丘部位血管主干已經(jīng)生成，垂直與上丘表面的軟腦膜且與軟腦膜中血管相連，隨著小鼠的發(fā)育上丘區(qū)血管逐漸密集。在上丘部位未見明顯的Reelin陽性染色但在P0至成年階段，GFAP在上丘帶狀層的有表達(dá)，大多緊貼

5、上丘軟腦膜血管。（3）在視皮層V1區(qū)P0階段已經(jīng)生成放射狀主干血管，垂直于軟腦膜且與軟腦膜中血管相連。隨著皮層發(fā)育，血管分支越來越多，密度增大。放射狀星型膠質(zhì)細(xì)胞多與血管伴行。在皮層發(fā)育過程中，Reelin蛋白主要表達(dá)在分子層，錐體細(xì)胞層和內(nèi)顆粒層可見少量陽性染色。實驗結(jié)論：在視覺系統(tǒng)血管發(fā)育過程中，視網(wǎng)膜中的血管發(fā)育與Reelin的表達(dá)在時間與空間上有一定的相關(guān)性，參與調(diào)控小鼠視網(wǎng)膜中血管的有序性發(fā)育，而在上丘和視皮層中的相關(guān)性不大。

6、
　　第二部分：Reelin在成年鯽魚、牛蛙、家鴿和家兔等幾種脊椎動物視網(wǎng)膜中的表達(dá)。實驗?zāi)康模禾骄考棺祫游锊煌锓N視網(wǎng)膜中Reelin和GFAP的表達(dá)情況。實驗方法：取成年野生鯽魚，牛蛙，家鴿和家兔視網(wǎng)膜，利用冰凍切片技術(shù)，進(jìn)行HE染色和免疫熒光染色。實驗結(jié)果：（1）Reelin在成年野生鯽魚、牛蛙、家鴿和家兔的視網(wǎng)膜中均有表達(dá)。（2）GFAP在成年野生鯽魚、牛蛙和家兔視網(wǎng)膜中均有表達(dá)，但在家鴿視網(wǎng)膜中未見明顯陽性染色。實驗結(jié)論