中藥腎絡通對UUO大鼠腎臟細胞增殖的影響.pdf

1、目的：觀察單側輸尿管結扎(UUO)模型大鼠細胞增殖標志物增殖細胞核抗原(PCNA)的表達，檢測與其調控相關的血清糖皮質激素誘導蛋白激酶-1(SGK-1)、細胞生長因子轉化生長因子-β1(TGF-β1)的改變，探討益氣活血通絡中藥腎絡通抑制UUO大鼠腎臟細胞增殖的作用及機制，為本方在臨床的應用提供實驗依據(jù)。
　　方法：實驗研究選用健康清潔級雌性Wistar大鼠48只，體重200±20克，實驗動物自由飲食與飲水，溫度條件控制在(22±

2、2)℃。適應性喂養(yǎng)1周后，將48只大鼠隨機分為4組，每組12只，即假手術組(Sham group)、UUO組(UUO group)、依普利酮組(EPL group)、腎絡通組(SLT group)。各組大鼠UUO造模方法如下：10％水合氯醛麻醉后，于腹部左側切開皮膚，游離出左側輸尿管，于輸尿管上1/3和中1/3處結扎離斷輸尿管并縫合。假手術組則僅游離輸尿管。術后給藥，依普利酮組給予依普利酮100mg·kg-1·d-1；中藥腎絡通組予腎絡

3、通煎劑26 g·kg-1·d-1，假手術組和UUO組則給予等容量生理鹽水。治療10d后，摘取左側腎臟稱重，縱向將腎臟一分為二，一半腎臟置于4%多聚甲醛中固定，另一半腎臟置于-70℃冰箱保存用于提取蛋白。應用免疫組化及 Western blot方法檢測PCNA、 SGK-1、TGF-β1的表達。
　　結果：⑴HE染色結果示，假手術組大鼠腎臟組織結構基本正常，間質偶見少量炎性細胞浸潤，無水腫，小管上皮細胞排列整齊，無濁腫；UUO組腎間

4、質可見大量炎性細胞浸潤，小管明顯擴張，上皮細胞脫落；依普利酮組和腎絡通組可見腎小管擴張及上皮細胞脫落與UUO組基本相同，但炎性細胞浸潤較UUO組明顯減少。Masson染色結果示，假手術組大鼠腎間質有少量膠原纖維成分表達，腎小球與腎小管基底膜結構清晰；UUO組大鼠間質膠原纖維成分表達明顯增多，腎臟結構紊亂；依普利酮組和腎絡通組膠原纖維成分表達與假手術組相比明顯增多，但較UUO組則明顯減少。天狼星紅染色結果示，假手術組大鼠腎小管基底膜及腎間

5、質可見少量膠原纖維成分表達；UUO組大鼠腎臟結構紊亂，間質膠原纖維成分表達顯著增多；依普利酮組及腎絡通組間質膠原纖維成分較假手術組顯著增多，與UUO組相比明顯減少。⑵檢測PCNA顯示假手術組腎小管有少量陽性細胞表達；UUO組陽性細胞數(shù)表達顯著增多，多見于腎小管上皮細胞與間質細胞；依普利酮組和腎絡通組陽性細胞數(shù)較假手術組增多但明顯少于UUO組。檢測SGK-1、TGF-β1表達，結果顯示假手術組SGK-1、TGF-β1呈弱表達，主要見于腎小

6、管上皮細胞，SGK-1以遠端小管為主；UUO組表達明顯增強，主要表達于腎間質細胞與腎小管上皮細胞；依普利酮組及腎絡通組表達與UUO組相比均顯著減弱。⑶采用Western blot方法檢測PCNA的表達，結果顯示：與假手術組相比，UUO組表達顯著上調，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；依普利酮組及腎絡通組PCNA表達與假手術組相比均增強，但與UUO組相比則明顯減弱，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；依普利酮組與腎絡通組相比，差異無統(tǒng)計學意

7、義(P＞0.05)。檢測SGK-1、TGF-β1表達，結果顯示：UUO組SGK-1、TGF-β1蛋白表達明顯增強，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；與UUO組相比，依普利酮組與腎絡通組表達均顯著減弱，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；依普利酮組與腎絡通組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結論：①梗阻性腎病可誘導醛固酮的活化，刺激腎臟細胞增殖，參與腎間質纖維化的形成。②依普利酮可通過阻斷醛固酮的活化作用，減輕梗阻性腎病中